Question

苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中，对环境有严重危害．小明同学准备依据图1操作步骤，从处理废水的活性污泥中分离筛选酚降解高效菌株．请回答下列问题：

 

（1）酚降解菌富集培养基含有蛋白胨、K₂HPO₄、MgSO₄、苯酚和水，其中可作为碳源的有 ______．

（2）将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐 ______．以达到富集酚降解菌的目的．若图1平板中菌落过于密集，应进一步 ______ ，以便于菌落计数与分离．制备平板培养基时除了需要水、营养物质外，还必须添加 ______ ．

（3）图2为连续划线法示意图，在图中 ______  （填图中序号）区域更易获得单菌落．

 

（4）采用比色测定法（使用苯酚显色剂）检测降解后的废水中苯酚残留量．先制作系列浓度梯度并进行显色反应，下表中1～5号比色管的苯酚浓度应分别为 ______ ．

管号	1	2	3	4	5	6
苯酚浓度（mg/L）						1

如果废水为50mg/L 苯酚溶液，降解后约有21%的苯酚残留，则需将残留液稀释 ______ （填序号：①5   ②10   ③20）倍后，再进行比色．

Answer

蛋白胨、苯酚 增加 稀释涂布 凝固剂 ③ 0、0.2、0.4、0.6、0.8 ③

【解析】

微生物培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求．对异养微生物来说，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源，即有些化合物作为营养要素成分时并不是起单一方面的作用。微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

（1）培养基成分中的有机物均可以提供碳源，即蛋白胨、苯酚也可以作为碳源。

（2）分析实验可知，实验目的是筛选酚降解菌，因此将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐增加，以达到富集苯酚降解菌的目的。若图1平板中菌落过于密集，应进一步稀释涂布，以便于菌落计数与分离。平板培养基属于固体培养基，该培养基需要加入琼脂作为凝固剂。

（3）图2为平板划线法，随着划线次数的增加，菌种进一步被稀释，因此图中③区域更易获得单菌落。

（4）进行实验时，首先需要设置浓度为0的苯酚作为空白对照组，并且6号试管苯酚浓度为1，由此可见，浓度梯度应该为0.2，即表中1～5号比色管的苯酚浓度应分别为0、0.2、0.4、0.6、0.8．如果废水为50mg/L 苯酚溶液，降解后约有21%的苯酚残留，即残留液中苯酚浓度约为10mg/L，与以上6支试管中的浓度相比，需要将残留液稀释20倍后，再进行比色。