Question

乙型脑炎和伪狂犬病是猪的两种常见传染病。下图是利用基因工程技术生产能同时预防这两种病疫苗的流程图，其中PrM为乙型脑炎的特异性抗原基因，PK、gG、gD为伪狂犬病的主要抗原基因，TK为伪狂犬病的毒性基因，pgG为启动子，BamH I和EcoR I为两种限制酶，其识别序列及切割位点分别是G↓GATCC、G↓AATTC。请回答。

（1）过程①所需的酶有________________。下列四种引物中适用于过程①的一对引物是______________。

P₁：5' TTGGATCCATGGAAGGCTCAATCATGTG 3'

P₂：5' CACAAGCTTAGATGACGTATCCAAGGAG 3'

P₃：5' TACGGTACCTTAGGGGTTAAGTGGG 3'

P₄：5' GCGAATTCTAACTGTAAGCCGGAGCG 3'

（2）若健康猪注射蛋白疫苗一段时间后被乙脑病毒感染，请在下图中画出病毒感染后体内抗体浓度变化曲线_______________。此时，抗体迅速产生的主要途径是_______________（用文字和箭头表示）。

（3）重组伪狂犬病毒中没有_______，因而不具毒性，注射后不会引发猪患病。

（4）将获得的病毒疫苗注射到猪体内，可使宿主获得_______________（特异性）免疫。重组伪狂犬病毒利用宿主细胞内物质合成自身物质，在细胞内________________，持续刺激机体，因此病毒疫苗具有用量小、作用更持久等优点。

Answer

逆转录酶、Taq酶（或热稳定DNA聚合酶）； P1、P4 （病毒抗原→）记忆细胞→浆细胞→抗体 TK（或毒性基因） 体液免疫、细胞 增殖并长期保留

【解析】

据图分析，过程①表示乙脑病毒的RNA逆转录形成相应的目的基因，并通过PCR技术扩增该目的基因；过程②表示构建基因表达载体；过程③表示将重组DNA导入受体细胞（大肠杆菌）的过程。

（1）根据以上分析已知，过程①涉及到逆转录和PCR技术，因此需要逆转录酶和耐高温DNA聚合酶（Taq酶）的催化。根据目的基因两侧的限制酶（BamHI和EcoRI）的识别序列可知，应该选择的引物是P1和P4。

（2）二次免疫抗体迅速产生的主要途径是抗原→记忆细胞→浆细胞→抗体。注射蛋白疫苗一段时间后被乙脑病毒感染后体内抗体浓度变化曲线如下图所示：

（3）根据题干信息已知，TK为伪狂犬病的毒性基因，因此重组伪狂犬病毒中不带TK基因的优点是不具毒性，注射后不会引发猪患病。

（4）将获得的病毒疫苗注射到猪体内，一方面病毒中抗原基因在猪细胞中大量表达，诱导猪获得体液免疫和细胞免疫；另一方面病毒在动物体内可增殖并长期保留，使得病毒投苗具有用量小、作用更持久等优点。