Question

某种细菌可以分解石油残存物(含有C、H、O元素)，现要分离、培养该细菌，操作步骤为：土壤取样→选择培养→梯度稀释→涂布样品到培养基→选择菌落。请据此回答：

（1）细菌与真菌最主要的区别在于：细菌___________________________________。

（2）石油残存物可以为该种细菌提供的营养物质是________________，分离该细菌的培养基从功能上叫做_____________培养基。

（3）取样时用到的一切工具均需要__________________。梯度稀释、涂布样品到培养基则必须在_____________________(填场所)进行。

（4）若需要对细菌计数，常用的简便方法是_______________，该方法测得的数目往往比实际值________________(填“大”或“小”)。

Answer

没有以核膜为界限的细胞核 碳源 选择 灭菌 酒精灯火焰旁 稀释涂布平板法 小

【解析】

常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌；微生物的分离是研究和利用微生物的第一步，也是微生物工作的基本方法和重要环节。土壤中的微生物很多，要从土壤中获得分解石油的细菌，接种最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法，平板划线分离法：由接种环以菌操作沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落，用途：一般多用于从菌种的纯化；稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞，计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。

（1）原核生物和真核生物的本质区别是有无以核膜为界的细胞核，细菌属于原核生物，真菌属于真核生物，因此细菌与真菌相比的区别在于细菌没有以核膜为界限的细胞核。

（2）微生物的生长需要碳源、氮源、水和无机盐等，石油可为该细菌的生长繁殖提供碳源。分离细菌的培养基从功能上属于选择培养基。

（3）微生物培养需要无菌环境，因此取样时用到的一切工具需要进行灭菌处理，使用稀释涂布平板法对微生物进行分离培养时，梯度稀释、涂布样品到培养基等操作需要在酒精灯火焰旁进行。

（4）对细菌计数，常用的简便方法是稀释涂布平板法，由于两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只有一个菌落，因此该方法统计到的菌落数往往比实际值偏小。