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红细胞含有大量的血红蛋白,我们可以选用猪、牛、羊或其他哺乳动物的血液来提取和分离...

红细胞含有大量的血红蛋白,我们可以选用猪、牛、羊或其他哺乳动物的血液来提取和分离血红蛋白,请回答下列有关问题:

1)实验前取新鲜的血液,要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠,取血回来,经处理并离心,收集血红蛋白溶液

加入柠檬酸钠的目的是________

以上所述的过程为样品处理,它包括________________、分离血红蛋白溶液。

2)收集的血红蛋白溶液可以在透析袋中透析,这就是样品的粗分离。

透析的目的是______________

透析过程中需要用到________缓冲液。

 

防止血液凝固 红细胞的洗涤 血红蛋白的释放 去除分子量较小的杂质 磷酸 【解析】 蛋白质的提取和分离: 1、原理:凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小来分离蛋白质的有效方法,相对分子质量小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道,路程长,移动的速度慢,相对分子质量大的蛋白质不容易进入凝胶内部的通道,路程短,移动的速度快,因此相对分子质量不同的蛋白质得以分离。 2、用磷酸缓冲液处理的目的是让血红蛋白处在稳定的pH范围内,维持其结构和功能。 3、分离血红蛋白溶液时,将搅拌好的混合液转移到离心管中,经过中速长时离心后,可明显看到试管中溶液分为4层,从上往下数,第1层为甲苯层,第2层为脂溶性物质的沉淀层,第3层为血红蛋白水溶液,第4层为杂质沉淀层。 4、气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序,降低分离效果。 5、血红蛋白的提取与分离的实验步骤主要有:(1)样品处理:①红细胞的洗涤,②血红蛋白的释放,③分离血红蛋白溶液。(2)粗分离:①分离血红蛋白溶液,②透析。(3)纯化:调节缓冲液面→加入蛋白质样品→调节缓冲液面→洗脱→收集分装蛋白质。(4)纯度鉴定--SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。 6、电泳法是利用待测样品中各种分子带电性质的差异和分子本身的大小、形状不同,使带电分子产生不同的迁移速度,从而实现样品中各种分子的分离或鉴定。 (1)①加入柠檬酸钠的目的是防止血液凝固。 ②样品处理包括红细胞的洗涤、血红蛋白的释放、分离血红蛋白溶液。 (2)①透析的目的是去除分子量较小的杂质。 ②透析过程中需要用到磷酸缓冲液。
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考点分析:
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“葡萄美酒夜光杯,欲饮琵琶马上催。醉卧沙场君莫笑,古来征战几人回。”这是唐诗中提及的葡萄酒。19世纪,法国的巴斯德发现葡萄汁“变”酒是酵母菌的发酵作用。

(1)在无氧的条件下,酵母菌能进行酒精发酵,反应式是__________________

(2)研究表明,酵母菌也可以在有氧条件下进行呼吸作用,说明酵母菌是一种____微生物。葡萄汁发酵后是否有酒精产生可以用重铬酸钾来检验,在酸性条件下,重铬酸钾与酒精反应呈现____色。

(3)酵母菌的酒精发酵过程一般控制在______温度范围,请简要说明理由______________________________

(4)葡萄酒呈现红色的原因 _____________,为提高水果的出汁率,使果汁变得澄清,在果汁生产中常用到_______________

 

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根据材料回答下列有关问题。

Ⅰ.某大学科研人员利用双重固定法,即采用戊二醛作交联剂(使酶相互连接),海藻酸钠来包埋小麦酯酶,研究固定化酶的性质,并对其最佳固定条件进行了探究。下图显示的是部分研究结果。(注:酶活力为固定化酶催化化学反应的总效率,包括酶的活性和酶的数量)

1)从图1可以看出:固定化小麦酯酶比游离的小麦酯酶对温度变化的适应性更_______

2)从图2可以看出:海藻酸钠浓度为______________时的小麦酯酶活力最强。当海藻酸钠浓度较低时,酶活力较低的原因是____________________________

Ⅱ.制备固定化酵母细胞的过程为

酵母细胞活化 配制CaCl2溶液 配制海藻酸钠溶液 海藻酸钠溶液与酵母细胞混合→ 固定化酵母细胞

3)活化就是让处于休眠状态的微生物重新恢复___________________状态。

4)此固定酵母细胞的方法是____________________________,固定化酵母细胞的优点是______________________________________________

5)制备固定化酶则不宜用此方法,原因是___________________________________

 

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图示某实验小组从土壤中筛选能高效降解地沟油细菌的过程。请回答:

1)土壤样品应该采集自_______________的土壤中。

2)图中的细菌培养基中主要物质有水、无机盐、______________________,从培养基的物理状态分析,在该培养基的配制过程中,还需要加入_____________

3)图中的选择培养基应以______________为唯一碳源。在鉴别培养基中可加入适量的________________(试剂)于平板中的菌落周围,洗去浮色后,如果菌落周围的现象是________________,则说明此菌株能够降解地沟油中的脂肪。

4)若使用稀释涂布平板法对菌液中细菌进行计数,需先将菌液进行_______________,然后将不同浓度的菌液用____________涂布到固体培养基表面,培养后计数。采用这种计数方法统计到的细菌数目往往比实际数目______,原因是________________。为了排除________________,需设置接种等量无菌水的培养基作为空白对照。

 

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如图是微生物平板划线示意图。划线的顺序为12345。下列操作方法正确的是(  )      

A.操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌

B.划线操作须在火焰上进行

C.5区域中才可以得到所需菌落

D.12345区域中划线前后都要对接种环灭菌

 

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凝胶色谱法分离蛋白质的主要依据是(   

A.溶解度大小 B.相对分子质量大小

C.吸附性质 D.所带电荷的性质和多少

 

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