Question

硒是一种生命必需的微量元素。亚硒酸钠对细菌的生长有明显的毒害作用，土壤中的一些富硒细菌可将其还原为红色单质硒。下图为土壤中富硒细菌的筛选和纯化过程。回答下列问题。

（1）若②中出现_________的现象，则说明培养基中的亚硒酸钠被细菌还原。

（2）梯度稀释的目的是_________。 将细菌从④接种至⑤应采用_________法。

（3）固定化富硒菌一般采用_________法。采用凝胶色谱法分离纯化还原亚硒酸钠的酶时，先从层析柱中洗脱出来的是相对分子质量较___________的蛋白质。

（4）研究人员筛选出--种只有较强富硒能力的菌株，现欲通过观察菌落来判断菌株对亚硒酸钠的耐受值，请将下列实验补充完整:

①配制系列浓度梯度的亚硒酸钠________（填“液体”或“固体”）培养基；

②向培养基中分别接种___________的该菌株菌液，在适宜条件下培养一段时间；

③观察菌落生长情况，________的培养基对应的最高亚硒酸钠浓度即为该菌株的最高耐受值。

Answer

培养基变红 使聚集在一起的细胞分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落 平板划线 包埋 大 固体 等量 有菌落生长

【解析】

微生物的实验室培养，常用到培养基，培养基，是指供给微生物、植物或动物（或组织）生长繁殖的，由不同营养物质组合配制而成的营养基质。一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）、维生素和水等几大类物质。培养基根据培养功能可分为基础培养基、选择培养基、加富培养基、鉴别培养基等。选择培养基是指一类根据特定微生物的特殊营养要求或其对某理化因素抗性的原理而设计的培养基。具有只允许特定的微生物生长，而同时抑制或阻止其他微生物生长的功能。凝胶色谱法（分配色谱法）原理：分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢。微生物计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液（梯度稀释），尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在。

（1）培养液中有亚硒酸钠，若培养基中有富硒细菌，可将亚硒酸钠还原为红色单质硒。

（2）梯度稀释的目的是使聚集在一起的细胞分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。 将细菌从④接种至⑤，为挑取单菌落接种至另一培养基，应采用平板划线法。

（3）细菌体积大，一般不容易从包埋材料中漏出，因此固定化富硒菌一般采用包埋法。采用凝胶色谱法分离纯化还原亚硒酸钠的酶时，先从层析柱中洗脱出来的是相对分子质量较大的蛋白质。

（4）①题干欲通过观察菌落来判断菌株对亚硒酸钠的耐受值，因此应配制系列浓度梯度的亚硒酸钠固体培养基。②利用实验设计的等量原则，向培养基中分别接种等量的该菌株菌液，在适宜条件下培养一段时间。③因为亚硒酸钠对细菌的生长有明显的毒害作用，因此观察菌落生长情况，有菌落生长的培养基对应的最高亚硒酸钠浓度即为该菌株的最高耐受值。