Question

下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中分别表示：tet^R为四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉索抗性基因，以及BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点。

据图回答：

（1）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用____________限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是____________。过程①可采用的操作方法是____________。为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用____________技术。

（2）过程②采用的生物技术是____________。在此之前，需要对代孕牛经过__________处理后，使之与供体的生理状况保持相同。如果对胚胎进行性别鉴定，可选用囊胚期的___________细胞进行鉴定。

（3）用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似（如下图所示）。图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。

①PCR技术扩增目的基因时从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物A的DNA片段所占的比例为_______。

②在第____________轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段。

Answer

Hind Ⅲ和BamH Ⅰ 启动子 显微注射技术 抗原一抗体杂交 胚胎移植技术 同期发情 滋养层 15/16 三

【解析】

图中显示，该项技术应用了基因工程和胚胎工程的相关操作。据图，仅将人乳铁蛋白基因切割下来，需要在人乳铁蛋白基因的左侧用BamHⅠ切割，右侧用HindⅢ切割。当人乳铁蛋白基因和质粒连接成重组质粒后，tetR基因被人乳铁蛋白基因隔开，不是完整的，而ampR基因是完整的，所以筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要含氨苄青霉素的培养基上进行。

（1）要将人的乳铁蛋白基因切割下来需要Hind Ⅲ和BamHⅠ，同时也要用这两种酶处理质粒，以便构建重组质粒。而启动子是基因表达调控的起始序列。将目的基因导入动物细胞一般采用显微注射法；而人乳铁蛋白是否成功表达，可采用抗原抗体杂交技术，检测牛奶中是否含有人乳铁蛋白。

（2）过程②采用的生物技术是胚胎移植技术。在此之前，需要对代孕牛经过同期发情处理后，使之与供体的生理状况保持相同。如果对胚胎进行性别鉴定，可选用囊胚期的滋养层细胞进行鉴定。

（3）①PCR技术扩增目的基因从理论上推测，每一次循环产物中不含引物A的DNA只有如图的最下面一个，其它的DNA均含有引物A，第四轮循环下来共得到16个DNA，含引物A的DNA片段所占的比例为15/16。

②在第三轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段。