Question

回答下列I、II两小题。

I．抗虫的转基因植物，含有Bt蛋白，也叫毒蛋白，Bt蛋白本身其实没有任何毒性，但是鳞翅目幼虫的肠道壁上有一种特别的蛋白，喜欢与Bt蛋白结合，引起肠道壁穿孔，导致幼虫死亡。

注： Cef， Carb 抑菌类抗生素

（1）抗虫植物的抗虫效果与Bt蛋白的表达量直接相关，用________________ 作为抗原，通过制备________________ 作为特异探针，对Bt蛋白表达进行检测。将Bt蛋白基因导入植物细胞的方法有________________ 和________________ 等。

（2）在农杆菌转化过程中，防止农杆菌过度生长是转基因成败的重要环节。因此植物材料和农杆菌共同培养结束后，转化组织需要________________ 处理，据图分析，选择抗生素的________________ 很关键。光电比色法可用于细菌细胞密度的吸光值的测定，OD₆₀₀指的是某种溶液在600nm波长处的吸光值。吸光值与溶液中吸光物质的浓度呈正比，通常用于细菌细胞密度（OD₆₀₀）测量；在测量过程中要保持溶液中的细菌处于____状态。 如图可知，________________ （填Cef或Carb）在低浓度条件下对农杆菌有更好的抑制效果。

II．回答与泡菜制作有关的问题：

（1）泡菜发酵过程中的主要菌种是________________， 在________________ 条件下，微生物将蔬菜中的糖和其他营养物质发酵成有机酸、________________ 和________________ 等。

（2）在泡菜制作过程中________________ ，________________ 两部操作主要是为了减少杂菌，还可以采用________________ ，________________ 两种方法缩短腌制时间。

Answer

Bt蛋白 单克隆抗体 农秆菌转化法 基因枪法 脱菌 种类和浓度 悬浮 Carb 假丝酵母和乳酸菌 无氧 醇类物质 亚硝酸（HNO2） 热水洗坛壁两次 加白酒 入坛前用开水浸泡一下蔬菜 加入腌制过的泡菜汁

【解析】

1.光电比色法是通过测量菌悬液的光密度（OD600）值来估算细菌数，吸光值与溶液中吸光物质的浓度呈正比。据图可知，浓度为300mg/L时两种抗生素都可以完全抑制农杆菌的生长，所以头孢霉素（Cef）和羧苄青霉素（Carb）对农杆菌都有很好的抑制效果。

2.基因工程的基本操作程序有四步：①目的基因的获取，②基因表达载体的构建，③将目的基因导入受体细胞，④目的基因的检测与鉴定。

3. 制作泡菜的实验原理：
（1）乳酸菌在无氧条件下，将糖分解为乳酸。
（2）利用乳酸菌制作泡菜的过程中会引起亚硝酸盐的含量的变化。
温度过高，食盐用量不足10%、腌制时间过短，容易造成细菌大量繁殖，亚硝酸盐含量增加。一般在腌制10天后，亚硝酸盐的含量开始下降。
（3）测定亚硝酸盐含量的原理：在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料，与已知浓度的标准显色液目测比较，估算泡菜中亚硝酸盐含量。

I．（1）抗虫植物的抗虫效果与Bt蛋白的表达量直接相关，可用Bt蛋白作为抗原，通过制备单克隆抗体作为特异探针，利用抗原-抗体杂交方法对Bt蛋白表达量进行检测。将Bt蛋白基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法和基因枪法等。

（2）在农杆菌转化过程中，防止农杆菌过度生长是转基因成败的重要环节。因此植物材料和农杆菌共同培养结束后，转化组织需要脱菌处理，选择合适的抗生素和使用的抗生素浓度是实验成败的关键。光比色法可用于细菌细胞密度的测定，在测量过程中要保持溶液中的细菌处于悬浮状态。分析图示可知，Cef（头孢霉素）和Carb（羧苄霉素）两种抗生素对农杆菌有很好的抑制效果；当Carb浓度为50mg/L时，OD600几乎降为0，即细菌细胞数目为0，说明抗生素Carb浓度为50mg/L时可以完全抑制农杆菌的生长，Carb在低浓度条件下对农杆菌有更好的抑制效果。

II．（1）泡菜发酵过程中的主要菌种是假丝酵母和乳酸菌； 在无氧条件下，微生物将蔬菜中的糖和其他营养物质发酵成有机酸、醇类物质和亚硝酸（HNO2）等。

（2）在泡菜制作过程中热水洗坛壁两次（去除杂菌）、加白酒（抑制杂菌生长）两部操作主要是为了减少杂菌污染；还可以采用入坛前用开水浸泡一下蔬菜（杀死植物细胞）、加入腌制过的泡菜汁（可以提供菌种）两种方法缩短腌制时间。