Question

小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验，实验包括制备培养基、灭菌、接种、培养及菌落观察与计数，请回答与此实验相关的问题：

（1）培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了________和_______。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是______________。对培养基进行灭菌，应该采用的方法是_______________。

（2）最常用的两种接种方法是________和_________，在培养过程中需要随机取若干灭菌后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目的________________。

（3）将放有滤膜的平板置于适宜条件下培养，每隔12 h统计一次菌落数目，应选取菌落数目________时的记录作为结果。如果经过培养后稀释倍数为10⁵的4个平板上菌落数分别为43、47、42、48，那么每升河水中约含大肠杆菌_____________个。用这种方法测定的细菌数量比实际活菌数量要______________，这是因为____________________________________________。

（4）为了检测大肠杆菌对抗生素的敏感性，在37℃培养箱中培养24h，使其均匀生长，布满平板。将分别含有A、B、C3种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，结果见下图。根据图的实验结果，为达到抗菌目的，最好选择的抗生素是________。若透明圈中出现了1个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是_____________。

Answer

氮源 碳源 水和无机盐 高压蒸汽灭菌法 平板划线法 稀释涂布平板法 检测培养基的配制（灭菌）是否合格 稳定 4.5×1010 少（低） 当两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的是一个菌落 青霉素 抗性突变菌株

【解析】

微生物的培养基一般都要含有水、碳源、氮源、无机盐，如蛋白胨在培养基中主要作为氮源，淀粉在培养基中主要作为碳源；实验室的灭菌方法一般有灼烧灭菌（适合于接种工具的灭菌）、干热灭菌（适合于耐高温的、需要保持干燥的物品的灭菌）、高压蒸汽灭菌（适合于培养基等物体的灭菌）。稀释涂布平板法能用于微生物的计数，其计算公式为：1毫升（克）样品中的菌株数=（C÷V）×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（毫升），M代表稀释倍数。

（1）根据以上分析已知，蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了氮源和碳源，此外细菌培养基的成分还应该包括水和无机盐；微生物培养基常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌法。

（2）常用的纯化微生物时的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法；为了检测培养基的配制（灭菌）是否合格，在培养过程中需要随机取若干灭菌后的空平板先行培养了一段时间。

（3）统计培养的菌落数目时应选取菌落数目稳定时的记录作为结果；如果经过培养后稀释倍数为105的4个平板上菌落数分别为43、47、42、48，则平板上平均菌落数=（43+47+42+48）÷4=45个，每毫河水中约含大肠杆菌数=（C÷V）×M=（45÷0.1）×105=4.5×107个，每升河水中约含大肠杆菌数=4.5×107×103=4.5×1010个；用稀释涂布平板法测定的细菌数量比实际活菌数量要少，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的是一个菌落。

（4）据图分析，含青霉素的滤纸片周围出现透明圈较大，说明大肠杆菌对青霉素敏感，故为达到抗菌目的，最好选择的抗生素是青霉素。若透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是该抗生素的抗性突变菌株。