Question

科学家利用基因工程和细胞核移植技术培育了绿色荧光蛋白转基因克隆猪。基本流程是：从荧光水母中获取目的基因，与有关载体重组，将其导入猪胎儿的成纤维细胞，经培养后再将成纤维细胞核植入去核的卵母细胞中，最后培养出转基因克隆猪。

（1）成纤维细胞贴壁生长分裂到表面相互接触时，就会停止分裂，这种现象叫做细胞的___________________。若将成纤维细胞进行传代培养，操作时首先用______________________________处理成细胞悬液。

（2）作为核移植受体细胞的去核卵母细胞一般处在____________期。供体细胞注入去核的卵母细胞中，常通过__________（物理方法）激活重组细胞，使其完成细胞分裂和发育进程。

（3）培养重组细胞时，将细胞所需的营养物质按其种类．数量严格配制而成的培养基称为___________培养基，但通常在培养基中还需要加入适量的_________________________等天然成分。细胞培养应在含5%的CO₂的恒温培养箱中进行，CO₂的主要作用是____________________。为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的____________。

Answer

接触抑制 蛋白酶 MⅡ中（减数第二次分裂中） 电脉冲（或电刺激） 合成 血清（或血浆） 调节培养基的pH 抗生素

【解析】

1.动物细胞培养的过程：取动物组织块→剪碎组织→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养液中（原代培养）→放入二氧化碳培养箱培养→贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液→转入培养液（传代培养）→放入二氧化碳培养箱培养。

2.动物细胞培养条件：

（1）无菌、无毒的环境：①消毒、灭菌；②添加一定量的抗生素；③定期更换培养液，以清除代谢废物；

（2）营养物质：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质；

（3）温度和PH：36.5℃±0.5℃；适宜的pH：7.2～7.4；

（4）气体环境：95%空气（细胞代谢必需的）和5%的CO2（维持培养液的pH）。

（1）细胞贴壁生长分裂到表面相互接触时，就会停止分裂，这种现象叫做细胞的接触抑制。若将成纤维细胞进行传代培养，操作时首先用胰蛋白酶处理成细胞悬液。

（2）选取处在MⅡ中（减数第二次分裂中）期的去核卵母细胞作为受体细胞；通过电脉冲（或电刺激）激活重组细胞，使其完成减数分裂和发育进程。

（3）将细胞所需的营养物质按其种类、数量严格配制而成的培养基称为合成培养基。动物细胞所需的营养物质：糖、氨基酸、促生长因 子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质。细胞培养应在含5%的CO2的恒温培养箱中进行，CO2的主要作用是调节培养基的pH。为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的抗生素。