Question

滨藜在含盐量0．6%以上的条件下生长，是耐盐碱基因开发的理想材料。若将滨藜的耐盐碱基因转移到水稻等农作物体内，将会大大提高水稻等农作物的种植面积。回答下列问题：

（1）从滨藜中获得耐盐碱基因需要用_____________酶处理，然后与含四环素抗性基因的Ti质粒连接构建___________，并导入农杆菌。在含有四环素的固体培养基中培养，目的是_________________________________________________________。

（2）用农杆菌感染时，应优先选用水稻_________（填“受伤的”或“完好的”）叶片与含重组质粒的农杆菌共同培养，选用这种叶片的理由是__________________________________。

（3）导入耐盐碱基因的植株细胞经过________形成愈伤组织，然后__________形成胚状体，继续发育形成转基因水稻幼苗。

（4）将生长至4叶期的转基因幼苗转入高浓度的NaCl溶液（含盐量0．6%以上）中培养，进行耐盐实验，用非转基因幼苗作为对照。培养30天后观察两者的存活率差异。若_________，则说明转基因植株获得了耐盐特性。

Answer

限制性核酸内切（或限制） 重组质粒（或重组DNA分子） 筛选出导入重组质粒的农杆菌 受伤的 叶片伤口处的细胞释放出大量酚类物质，可吸引农杆菌移向这些细胞 脱分化 再分化 转基因植株存活率高于非转基因植株

【解析】

基因工程的工具酶有限制酶和DNA连接酶，基因工程的操作步骤：一是获取目的基因；二是构建基因表达载体（核心）；三是将目的基因导入受体细胞（导入植物细胞一般有农杆菌转化法、基因枪法、花粉管道法等）；四是检测和鉴定目的基因（一是检测目的基因是否导入成功，二是检测目的基因是否成功表达，三是检测目的基因控制的性状是否能在植株上表现出来）。

（1）使用限制酶从滨藜中获得耐盐碱基因，与含抗生素抗性基因的Ti质粒连接构建基因表达载体（或重组质粒），并导入农杆菌，将其在含有四环素的固体培养基中培养，目的是筛选出导入重组质粒的农杆菌。

（2）当植物体受到损伤时，伤口处的细胞会分泌大量的酚类化合物，吸引农杆菌移向这些细胞，因此用农杆菌感染时，优先选用水稻受伤的叶片。

（3）含有目的基因的植物细胞先脱分化形成愈伤组织，然后再分化形成根、芽和胚状体，然后继续发育形成转基因幼苗。

（4）将生长至4叶期的转基因水稻幼苗转入含盐量0．6%以上的环境中培养，进行实验，用非转基因幼苗作为对照。若转基因植株存活率高于非转基因植株，说明转基因水稻植株获得了耐盐特性。