Question

某研究性学习小组了解到泡菜中的乳酸菌除了在发酵中产生乳酸，还可以降解亚硝酸盐，该小组利用泡菜液进行了相关的研究。请回答下列问题：

（1）测定泡菜中亚硝酸盐的含量可以用_________法。

（2）小组成员用改良的MRS固体培养基分离乳酸菌，该培养基成分如下：

蛋白胨	牛肉膏	酵母膏	葡萄糖	CaCO3	琼脂	蒸馏水	其他成分略
10g	10g	10g	20g	20g	20g	1000ml

①该培养基因含碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙，从而在菌落周围形成溶钙圈，该培养基属于__________（填“选择”成“鉴别”）培养基。

②小组成员将泡菜液进行梯度稀释后，取0．1ml加入到50℃左右的培养基中摇匀，待凝固后，再在其上加盖一层透明的固体培养基。在50℃左右操作的原因是_____________________，加盖一层透明的固体培养基的目的是______________________________。

③在恒温培养箱中培养72h后，挑取溶钙圈较大的菌落，用平板划线法进行进一步纯化。若下图甲是接种培养后的菌落分布图，对应的平板划线操作示意图为___________图。

④乳酸菌在-20℃的冷冻箱中长期保存时，需要加入一定量的__________________。

Answer

比色 鉴别 此时培养基为液态且不烫手 隔绝空气（氧气），确保无氧环境 丙 甘油

【解析】

1、培养基按功能分：

种类

制备方法

特征

用途

选择培养基

培养基中加入某种化学成分

根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛选率

加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌

鉴别培养基

加入某种试剂或化学药品

依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计

鉴别和区分菌落相似的微生物伊红和美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌

2、运用平板划线法接种微生物时，在进行第二次以及其后的划线操作时'要从上一次划线的末端开始划线。每次划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
3、菌种保存

临时保存法

甘油管藏法

适用对象

频繁使用的菌种

长期保存的菌种

培养及类型

固体斜面培养基

液体培养基

温度

4℃

-20℃

方法

菌落长成后于冰箱中保存，每3～6个月将菌种从旧的培养基转移到新鲜培养基上

将培养的菌液与等体积灭菌后的甘油混合均匀后于冷冻箱内保存

缺点

菌种易被污染或产生变异

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（1）测定泡菜中亚硝酸盐的含量可以用比色法。

（2）①该培养基因含碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙，从而在菌落周围形成溶钙圈，该培养基属于鉴别培养基。
②小组成员将泡菜液进行梯度稀释后，取0.1ml加入到50℃左右的培养基中摇匀，待凝固后，再在其上加盖一层固体培养基，在50℃左右操作的原因是此时培养基为液态且不烫手，加盖一层固体培养基的目的是隔绝空气（氧气），确保无氧环境。
③使用平板划线法时，在进行第二次以及其后的划线操作时要从上一次划线的末端开始划线，如图丙所示。
④长期保存菌种应该用甘油管藏法，因此乳酸菌在-20℃的冷冻箱中长期保存时，需要加入一定量的甘油。