Question

请分析回答与微生物有关的问题：

（1）微生物接种方法很多，最常用的是平板划线法和_________。平板划线时，接种环通过________灭菌，在第二次及以后的操作时，总是从上一次的末端开始，这一样做的目的是_________________。

（2）要从土壤中分离纯化产脂肪酶细菌时，常常需要进行选择培养，目的是__________，然后再接种并培养，接种时挑取了菌液在3块相同平板上划线，结果其中1块平板的各划线区均未见菌落生长，最可能的原因是_________________。

（3）为了统计样品中活菌的数目，在细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为10⁵的土壤样品液0.1 ml，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191，则每克士壤样品中的细菌数量___________个。对菌落数目进行统计时，应选取菌落数日稳定时的记录作为结果，这样做的原因是_______________________________。

（4）为长期保存纯化的优质菌种，可以采用__________________的方法。

Answer

稀释涂布平板法 灼烧 将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落 增大产脂肪酶细菌的浓度 接种环温度过高，产脂肪酶细菌被杀死 1.75×108 防止因培养时间不足而导致遗漏菌落数目 甘油管藏

【解析】

单菌落分离法包含划线分离法和稀释涂布平板法，常用于分离获得单菌落。划线分离法是用接种环以无菌操作沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来。稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。此法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数。

（1）平板划线法和稀释涂布平板法是两种微生物接种最常用的方法。平板划线时，将接种环在酒精灯火焰上灼烧，进行灼烧灭菌。在第二次及以后的操作时，总是从上一次的末端开始，菌体密度越来越小，这样可以将聚集的菌体逐步稀释，可以获得单菌落。

（2）要从土壤中分离纯化产脂肪酶细菌时，常常需要进行选择培养，把其它杂菌淘汰掉，增大脂肪酶细菌的浓度。3块相同平板上划线，只有1块平板的各划线区均未见菌落生长，说明原菌种及培养基都没问题，最可能的原因是接种环温度过高，产脂肪酶细菌被杀死。

（3）平板上长出的细菌菌落数只有三个（156、178、191）是符合要求的，则每克士壤样品中的细菌数量为（156+178+191）÷3÷0.1×105=1.75×108个。菌落形成需要时间，因此对菌落数目进行统计时，应选取菌落数日稳定时的记录作为结果，这样做可防止因培养时间不足而导致遗漏菌落数目。

（4）甘油管冷冻保藏法是利用微生物在甘油中生长和代谢受到抑制的原理达到保藏目的。长期保存纯化的优质菌种，可以采用甘油管藏的方法。