Question

人血清白蛋白(HSA)具有重要的医用价值，只能从人血浆中制备。图一是以基因工程技术获取重组HSA的两条途径，其中报告基因表达的产物能催化无色物质K呈现蓝色。图二为相关限制酶的识别序列和切割位点，以及HAS基因两侧的核苷酸序列。据图回答下列问题：

（1）依据图一和图二分析，在构建基因表达载体时下列叙述错误的是（_____）

A．应该使用酶B和酶C获取HSA基因

B．应该使用酶A和酶B切割Ti质粒

C．成功建构的重组质粒含1个酶A的识别位点

D．成功建构的重组质粒用酶C处理将得到2个DNA片段

（2）PCR技术应用的原理是____________，在利用该技术获取目的基因的过程中，以从生物材料中提取的DNA作为模板，利用____________寻找HSA基因的位置并进行扩增。

（3）图一过程①中需将植物细胞与___________混合后共同培养，旨在让___________整合到植物细胞染色体DNA上；除尽农杆菌后，还须转接到含____________的培养基上筛选出转化的植物细胞。

（4）图一③过程中将目的基因导入绵羊受体细胞，采用最多，也是最为有效的方法是______________。

（5）为检测HSA基因的表达情况，可提取受体细胞的 __________________，用抗血清白蛋白的抗体进行杂交实验。

Answer

C DNA(双链)复制 引物 农杆菌 T-DNA 无色物质K 显微注射技术 蛋白质

【解析】

基因工程的操作步骤：

1、获得目的基因（目的基因的获取）

①从自然界中己有的物种中分离出来，如可从基因文库中获取。
②用人工的方法合成。
获得原核细胞的目的基因可采取直接分离，获取真核细胞的目的基因般人工合成。

人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法。

③利用PCR技术扩增目的基因
PCR的含义：是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。

原理：DNA双链复制

2、制备重组DNA分子（基因表达载体的构建）

①重组DNA分子的组成：除了目的基因外，还必须有标记基因。

②方法：同种限制酶分别切割载体和目的基因，再用DNA连接酶把两者连接。

3、转化受体细胞（将目的基因导入受体细胞）
①转化的概念：是且的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和衣达的过程。 ②常用的转化方法：

将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是农杆菌介导转化技术(农杆菌转化法)，其次还有基因枪法和花粉管通道技术(花粉管通道法)。

将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是显微注射技术。此方法的受休细胞多为受精卵；将目的基因导入微生物细胞： Ca2+处理法。
4、目的基因的检测与鉴定
①首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子杂交技术。

②其次还要检测目的基因是否转录出mRNA，方法是采用分子杂交技术。

③最后检测目的基因是翻译成蛋白质，方法是采用抗原一抗体杂交技术。

④讲行个休生物学鉴定。

（1）

A、由图中DNA序列和酶切位点序列可知应使用酶B和酶C切割获取HSA基因，A正确；

B、导入的目的基因时应在T-DNA上，因此Ti质粒应用酶A和酶B切割，因为酶A和酶C切出的黏性末端也能互补配对，可以将目的基因连接进去，B正确；

C、成功建构的重组质粒含2个酶A的识别位点，C错误；

D、成功构建的重组质粒用酶C处理能得到2个DNA片段，应是A-C，和C-A片段，D正确。

故选C。

（2）PCR技术应用的原理是DNA(双链)复制，在利用该技术获取目的基因的过程中，以从生物材料中提取的DNA作为模板，利用引物寻找HSA基因的位置并进行扩增。

（3）图一过程①中需将植物细胞与农杆菌混合后共同培养，利用农杆菌的侵染特性，让T-DNA整合到植物细胞染色体DNA上；除尽农杆菌后，为了筛选出转化的植物细胞，利用重组质粒上的报告基因表达的产物能催化无色物质K呈现蓝色的特性，进行筛选，故还须将植物细胞转接到含无色物质K的培养基上。

（4）图一③过程中将目的基因导入绵羊受体细胞，通常采用较多的方法是显微注射技术。

（5）为检测HSA基因的表达情况，可利用抗原抗体杂交技术，具体做法是：提取受体细胞的蛋白质，用抗血清白蛋白的抗体做杂交实验。