Question

阅读下列有关病毒的材料并回答题目。

Ⅰ．2019新型冠状病毒，即“2019-nCoV”，为有包膜病毒。颗粒呈圆形或椭圆形，直径50～200nm。颗粒表面有棒状突起，使病毒表面看起来形如花冠，故而得名。2019-nCoV基因组长度为29．8Kb，为单股正链RNA，其5’端为甲基化帽子，3’端有多聚腺苷酸（PolyA）结构，可直接作为翻译模板。截至2020年3月25日上午10时，世界范围确诊感染此病毒的人数已累计达到412461人。

（1）下列选项错误的是_____

A．细胞膜能控制物质进出，故该病毒只能侵染受损细胞，使人患病

B．由于没有核糖体，这种病毒无法合成蛋白质，其包膜组成一定不含蛋白质

C．病毒的遗传物质水解后可产生一分子核苷，一分子含氮碱基与一分子磷酸

D．此病毒的单股正链RNA，只有转录形成对应的负链RNA才能附着在细胞的核糖体上

（2）这种病毒的遗传物质为_____，研究人员紧急研发了核酸检测试剂盒，以此来检测病毒，检测此病毒的核酸可使用_______法。研究人员发现，病毒的中间宿主为蝙蝠，某些情况下，病毒可在不同动物身体内翻译出基本相同的多肽链，这是因为_____。

（3）病毒入侵人体后，引起相关细胞分泌抗体，该抗体并不会与其他病症的抗原结合，这体现了________，此原理也可应用于该病的检测。若要用细胞工程的方法生产针对2019-nCoV上抗原的单克隆抗体，用到的技术有_________和_________。

（4）将2019-nCoV不稳定的RNA转换成DNA后，技术人员常采用荧光定量PCR技术定量检测样本中病毒的核酸含量。其原理如图：在PCR反应体系中每加入一对引物的同时，加入一个与某条模板链互补的荧光探针，当_________催化子链延伸至探针处，会水解探针，使荧光监测系统接受到荧光信号，即每扩增一次，就有一个荧光分子生成。反应最终的荧光强度与PCR起始状态_________含量呈正相关。

Ⅱ．朊病毒是一种只含蛋白质而不含核酸的病原微生物。按图示1→2→3→4进行实验，验证朊病毒侵染因子是蛋白质，题中所用牛脑组织细胞为无任何标记的活体细胞。

（1）本实验采用的研究方法是______。

（2）从理论上讲，经1→2→3→4实验离心后上清液中______（填“能大量”或“几乎不能”）检测到³²P，沉淀物中___________（填“能大量”或“几乎不能”）检测到³²P，出现上述结果的原因是：_________。

（3）如果添加试管5，从试管2中提取朊病毒后先加入试管5同时添加³⁵S标记的（NH₄）₂³⁵SO₄，连续培养一段时间后，再提取朊病毒加入试管3，培养适宜时间后离心，检测放射性应主要位于_______中，少量位于_______中，原因是：_____________。

（4）一般病毒的增殖同朊病毒之间的最主要区别是：一般的病毒侵染细胞是向宿主细胞提供________（物质），利用宿主细胞的_______________等物质进行增殖。

Answer

ABCD RNA 分子杂交 （几乎）所有生物共用一套密码子 抗体具有特异性 动物细胞培养 动物细胞融合 Taq酶 模板DNA 同位素标记法 几乎不能 几乎不能 朊病毒不含核酸只含蛋白质，蛋白质中磷含量极低，故试管2中提取的朊病毒几乎不含32P 沉淀物 上清液 被35S标记的朊病毒（蛋白质），大部分进入牛脑组织细胞中，只有少量的朊病毒可能没侵入牛脑组织细胞 核酸 核苷酸和氨基酸

【解析】

1、病毒不具有独立代谢能力，只能寄生在活细胞中。据遗传物质不同，可分为DNA病毒和RNA病毒。2019-nCoV的核酸为单股正链RNA，其5’端为甲基化帽子，3’端有多聚腺苷酸（PolyA）结构，可直接作为翻译模板。

2、朊病毒不能独立生活，在活细胞内才能增殖，所以要标记朊病毒需先培养带标记的宿主细胞—牛脑组织细胞，再让朊病毒侵染带标记的牛脑组织细胞，完成对朊病毒的标记。因为朊病毒没有核酸，只有蛋白质，蛋白质中磷含量极低，故离心后上清液和沉淀物中都几乎不含32P；用35S标记的朊病毒侵入牛脑组织细胞，由于少量朊病毒不能侵染成功，所以放射性物质主要位于沉淀物中，上清液中含少量放射性物质。朊病毒是一类非正常的病毒，它不含有通常病毒所含有的核酸。

Ⅰ（1）A、细胞膜控制物质进出细胞的作用是相对的，2019-nCoV表面的刺突糖蛋白能与人体细胞表面ACE2 受体蛋白特异性结合，从而侵染细胞，2019-nCoV并不是只能侵染受损细胞，A错误；

B、病毒没有核糖体，利用宿主细胞的核糖体合成蛋白质，2019-nCoV的包膜成分中含有蛋白质，其刺突糖蛋白能识别人体细胞膜上的受体，B错误；

C、2019-nCoV的核酸为单股正链RNA，即遗传物质为RNA，初步水解可形成四种核糖核苷酸，彻底水解可形成核糖、磷酸和四种含氮碱基，C错误；

D、由题意可知，此病毒的单股正链RNA，可直接作为翻译模板，所以可直接附着在宿主细胞的核糖体上进行翻译，不需要转录形成对应的负链RNA，D错误。

故选ABCD。

（2）这种病毒只含RNA，故遗传物质为RNA。利用试剂盒检测病毒所利用的是分子杂交技术，其原理为碱基互补配对原则；因为（几乎）所有生物共用一套密码子，所以病毒可在不同动物身体内翻译出基本相同的多肽链。

（3）抗体具有特异性，一种抗体只能和一种抗原发生特异性结合。单克隆抗体的制备过程中，需要将经过免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，经过动物细胞培养并筛选后获得能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，并将该杂交瘤细胞进行体内或体外培养获得单克隆抗体，所以该过程用到的技术有动物细胞培养和动物细胞融合。

（4）PCR技术中延伸DNA子链的酶为Taq酶。题干中提出“加入一个与某条模板链互补的荧光探针”，并且“每扩增一次，就有一个荧光分子生成”，因此反应最终的荧光强度与起始状态模板DNA含量呈正相关。

Ⅱ（1）由图可知，本实验采用了同位素标记法。
（2）由于朊病毒不含核酸只含蛋白质，蛋白质中磷含量极低，故试管2中提取的朊病毒几乎不含32P。因此，从理论上讲，离心后上清液中几乎不能检测到32P，沉淀物中几乎不能检测到32P。
（3）经试管5中牛脑组织细胞培养出的朊病毒（蛋白质）被35S标记，提取后加入试管3中，35S随朊病毒侵入到牛脑组织细胞中，因此放射性物质主要位于沉淀物中。同时会有少量的朊病毒不能成功侵入牛脑组织细胞，离心后位于上清液中，因此上清液中含少量放射性物质。
（4）一般病毒同朊病毒之间的最主要区别是：一般病毒侵入细胞是向宿主细胞提供核酸，利用宿主细胞的核苷酸和氨基酸合成自身的核酸和蛋白质。