Question

血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，负责血液中和部分的运输。根据血红蛋白的提取和分离流程图（如图），请回答下列问题：

（1）凝胶色谱法中所用的凝胶大多数是由______________等多糖类化合物构成的微小多孔球体。

（2）将实验流程补充完整；A为______________，B为______________。

（3）洗涤红细胞次数过少会影响分离效果的原因是____________________________。

（4）在装填色谱柱时不能有气泡存在，因为____________________________，降低分离效果；如果____________________________，说明色谱柱制作成功。

（5）SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中，SDS能与各种蛋白质结合形成蛋白质-SDS复合物，由于SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差别，从而使电泳的迁移率完全取决于____________________________。

Answer

葡聚糖或琼脂糖 血红蛋白的释放 凝胶色谱柱的装填 无法除去血浆蛋白 气泡会扰乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序 红色区带均匀一致地移动 分子的大小

【解析】

血红蛋白的提取与分离的实验步骤主要有：（1）样品处理：①红细胞的洗涤，②血红蛋白的释放，③分离血红蛋白。（2）粗分离：①分离血红蛋白溶液，②透析。（3）纯化：调节缓冲液面→加入蛋白质样品→调节缓冲液面→洗脱→收集分装蛋白质。（4）纯度鉴定--SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。

（1）凝胶色谱法中所用的凝胶大多数是由葡聚糖、琼脂糖等多糖类化合物构成的微小多孔球体。

（2）血红蛋白的提取和分离流程为：红细胞的洗涤→血红蛋白的释放→分离血红蛋白溶液→透析→凝胶色谱柱的制作→凝胶色谱柱的装填→样品的加入和洗脱。可见，A表示血红蛋白的释放，B表示凝胶色谱柱的装填。

（3）洗涤红细胞的目的是去除杂蛋白，以利于后续步骤的分离纯化，洗涤次数过少，无法去除血浆蛋白，影响分离效果。

（4）由于气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果，所以在装填凝胶色谱柱时，不得有气泡产生。在蛋白质分离过程中，如果红色区带均匀一致地移动，说明色谱柱制作成功。

（5）SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中，SDS能与各种蛋白质结合形成蛋白质-SDS复合物，由于SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差别，从而使电泳的迁移率完全取决于分子的大小。