Question

甜味蛋白Brazzein是从一种西非热带植物的果实中分离得到的一种相对分子质量较小的蛋白质，它含有54个氨基酸，是目前最好的糖类替代品。迄今为止，已发现Brazzein基因在数种细菌、真菌和高等植物、动物细胞中都能表达。请回答下列问题：

（1）Brazzein基因可从原产植物中分离得到，实际是从受体菌中获取，这种方法叫从________中获取，包括____________和_____________，还可以通过__________的方法获得，此方法在基因比较小，且__________已知的情况下较为适用。

（2）构建基因表达载体是基因工程的核心步骤，其目的是_________________，同时，使目的基因能够表达和发挥作用。基因表达载体中，除了目的基因外，还必须有_______、_____、________、复制原点等。

（3）若受体细胞是大肠杆菌，可先用Ca^2＋处理细胞，使其________________，再将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与大肠杆菌混合。若受体是哺乳动物，则可将Brazzein基因与______________等调控组件重组在一起，以便从乳汁中获得大量的Brazzein蛋白。

Answer

基因文库 基因组文库 部分基因文库 人工合成 核苷酸序列 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代 启动子 终止子 标记基因 处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态（或称为感受态细胞） 乳腺蛋白基因的启动子

【解析】

基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）Brazzein基因作为目的基因，可从原产植物中分离得到，实际是从受体菌中获取，这种方法叫从基因文库中获取，基因文库包括基因组文库和部分基因文库，还可以通过人工合成的方法获得，此方法适用于基因比较小，且核苷酸序列已知的情况。

（2）构建基因表达载体是基因工程的核心步骤，其目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用。基因表达载体中，除了目的基因外，还必须有启动子、终止子、标记基因、复制原点等。

（3）若受体细胞是大肠杆菌，可先用Ca2＋处理细胞，使其成为感受态细胞，再将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与大肠杆菌混合。若受体是哺乳动物，则可将Brazzein基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，以便从乳汁中获得大量的Brazzein蛋白。