Question

人血清白蛋白（HSA）具有重要的医用价值，只能从人血浆中制备。图一是以基因工程技术获取重组HSA的两条途径，其中报告基因表达的产物能催化无色物质K呈现蓝色。图二为相关限制酶的识别序列和切割位点，以及HAS基因两侧的核苷酸序列。据图回答下列问题：

（1）依据图一和图二分析，在构建基因表达载体时下列叙述错误的是___________。

A．应该使用酶B和酶C获取HSA基因

B．应该使用酶A和酶B切割Ti质粒

C．成功建构的重组质粒含1个酶A的识别位点

D．成功建构的重组质粒用酶C处理将得到2个DNA片段

（2）PCR技术应用的原理是____________，在利用该技术获取目的基因的过程中，以从生物材料中提取的DNA作为模板，利用____________寻找HSA基因的位置并进行扩增。

（3）图一过程①中需将植物细胞与农杆菌混合后共同培养，旨在让___________整合到植物细胞染色体DNA上；除尽农杆菌后，还须转接到含____________的培养基上筛选出转化的植物细胞。

（4）图一③过程中将目的基因导入绵羊受体细胞，采用最多，也是最为有效的方法_________。

（5）为检测HSA基因的表达情况，可提取受体细胞的_________________，用抗血清白蛋白的抗体进行杂交实验。

Answer

C DNA（双链）复制 引物 T-DNA 无色物质K 显微注射技术 蛋白质

【解析】

基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）A、由图中DNA序列和酶切位点序列可知应使用酶B和酶C切割获取HSA基因，A正确；

B、导入的目的基因时应在T-DNA上，因此Ti质粒应用酶A和酶B切割，因为酶A和酶B切出的黏性未不能互补配对，可以将目的基因连接进去，B正确；

C、据图一图二分析可知，成功建构的重组质粒上不再有酶A的识别位点，C错误；

D、成功构建的重组质粒用酶C处理能得到2个DNA片段，应是A-C，和C-A片段，D正确。

故选C。

（2）PCR技术应用的原理是DNA（双链）复制，在利用该技术获取目的基因的过程中，以从生物材料中提取的DNA作为模板，利用引物寻找HSA基因的位置并进行扩增。

（3）图一过程①中需将植物细胞与农杆菌混合后共同培养，利用农杆菌的侵染特性，让T-DNA整合到植物细胞染色体DNA上；除尽农杆菌后，为了筛选出转化的植物细胞，利用重组质粒上的报告基因表达的产物能催化无色物质K呈现蓝色的特性，进行筛选，故还须将植物细胞转接到含无色物质K的培养基上。

（4）图一③过程中将目的基因导入绵羊受体细胞，通常采用较多的方法是显微注射技术。

（5）为检测HSA基因的表达情况，可利用抗原抗体杂交技术，具体做法是：提取受体细胞的蛋白质，用抗血清白蛋白的抗体做杂交实验。