Question

回答与分离以尿素为氮源的微生物有关的问题：

（1）有些细菌含有_________，它们可以通过降解尿素作为其生长的氮源。请用化学反应式表示这类细菌降解尿素的过程____________________。

（2）本实验需通过比较尿素固体培养基和 LB 固体培养基菌上的落数，了解土壤稀释液中能以尿素为氮源的微生物的比例，因此要用____________（填方法）进行接种。配置培养基时选择琼脂糖作为凝固剂的原因是___________。尿素溶液的灭菌选择的方法是______。

（3）已知氨与纳氏试剂反应生成淡红色络合物。为了定量测定所分离的微生物对尿素的降解能力，可选用液体培养基培养，并利用光电比色法测定培养液 NH₃ 的含量。步骤如下：第一步，预实验。将培养液过滤和脱色处理后，用纳氏试剂显色处理。用光程为 1cm 的比色杯在 570nm 处测定光密度值。若光密度值偏低，应选择____（ A．增大光程，光波长不变B．增大光程，光波长增加 C．减小光程，光波长不变 D．减小光程，光波长增加）处再次测定光密度值， 直到数据适宜为止。第二步，标准曲线的制作。用蒸馏水配制______，与纳氏试剂反应后，用比色计测定，并制作____________的标准曲线。第三步，样品处理。将培养液过滤后，进行脱色处理，用纳氏试剂显色处理。

第四步，样品测定与计算。

Answer

脲酶 涂布分离法 琼脂糖中不含N元素 G6玻璃砂漏斗过滤 A 一系列浓度的氨标准溶液 氨浓度与光密度值

【解析】

1、土壤中分解尿素的细菌的分离的原理：培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。
2、微生物常见的接种的方法：

①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。

②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

（1）能够降解尿素的细菌含有脲酶，其降解尿素的方程式为：。

（2）根据题意分析，本实验要观察培养基上的菌落数，因此应该用涂布分离法进行接种；配置培养基时选择琼脂糖作为凝固剂的原因是琼脂糖中不含N元素；尿素溶液的灭菌选择的方法是G6玻璃砂漏斗过滤。

（3）根据题意分析，第一步预实验中，将培养液过滤和脱色处理后，用纳氏试剂显色处理。用光程为1cm的比色杯在570nm处测定光密度值。若光密度值偏低，应选择增大光程，光波长不变，处再次测定光密度值，直到数据适宜为止。第二步，标准曲线的制作时，用蒸馏水配制一系列浓度的氨标准溶液，与纳氏试剂反应后，用比色计测定，并制作氨浓度与光密度值的标准曲线。