Question

下图为获得抗除草剂转基因玉米的技术路线，请回答：

（1）构建表达载体选择限制性核酸内切酶时，要求Ti质粒内每种限制性核酸内切酶只有一个切割位点，同时要求酶切后，G基因形成的两个粘性末端序列不相同，这个过程需用______种限制酶，目的是___________。除草剂抗性基因G和Ti质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是________________________

（2）农杆菌转化愈伤组织时，T-DNA携带_______________插入受体细胞的核DNA。若核DNA中仅插入一个G基因，自交后代含G基因的植株中，纯合子占________________。

（3）获得抗除草剂转基因玉米涉及到多次筛选，其中筛选含重组质粒的农杆菌应使用含_______________的选择培养基，使用含_______________的选择培养基筛选出转化的愈伤组织，再诱导愈伤组织再生出抗除草剂转基因玉米。

Answer

2 防止酶切产物自身环化 磷酸二酯键 抗除草剂基因G 1/3 抗生素 除草剂

【解析】

基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质-抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）在构建基因表达载体时，为了防止酶切产物自身环化，需要使用2种不同的限制酶对目的基因（除草剂抗性基因G）和质粒进行切割；DNA连接酶催化形成的化学键是磷酸二酯键。

（2）农杆菌转化愈伤组织时，T-DNA携带目的基因（除草剂抗性基因G）插入受体细胞的核DNA；若核DNA中仅插入一个G基因，则转基因植株相当于杂合子，其自交后代含G基因的植株中，纯合子占1/3。

（3）据图分析，图示质粒上的标记基因是抗生素抗性基因，因此筛选含重组质粒的农杆菌应使用含抗生素的选择培养基；应该使用含除草剂的选择培养基筛选出转化的愈伤组织，再诱导愈伤组织再生出抗除草剂转基因玉米。