Question

埃博拉病毒（EBO）呈纤维状，EBO衣壳外有包膜，包膜上有5种蛋白棘突（VP系列蛋白和GP蛋白），其中GP蛋白最为关键，能被宿主细胞强烈识别。请回答下列问题：

（1）基因疫苗指的是DNA疫苗，要获得编码GP蛋白抗原的基因疫苗，首先要提取出病原体的RNA，并以RNA为模板通过___________法合成DNA。要大量获得表达特异抗原的基因，可采用___________技术进行扩增。该技术必须需要脱氧核苷酸、ATP、____________、模板_________以及______________酶。

（2）以GP蛋白作为疫苗比基因疫苗更安全，其原因是GP蛋白自身没有感染力，但保留有__________的特性。为了从牛分泌的乳汁中生产GP蛋白，在基因导入牛的___________（受体细胞）前，基因的首端必须含有使其特异性表达的__________________，才能驱动转录过程，这种通过分泌乳汁来生产所需要的药品的转基因动物称为_______________。转基因牛是否培育成功，可以通过_____________技术从分子水平进行检测。

（3）为了获得纯净的针对EBO的单一抗体，科研人员利用经EBO免疫后小鼠的_____________与鼠的骨髓瘤细胞进行融合，需要通过两次筛选后才能得到所需要的细胞，其中第一次筛选的目的是为了得到_____________细胞，第二次筛选的目的是为了得到能够产生针对__________________的___________________细胞，通过这种方法获得的抗体，其特点是___________________，可以用此抗体与药物制成“生物导弹”，抗击EBO。

Answer

反转录 PCR技术 引物 DNA Taq 抗原 受精卵 牛乳腺蛋白基因的启动子 乳腺（房）生物反应器 抗原—抗体杂交 B淋巴细胞 杂交瘤 EBO 杂交瘤 特异性强、灵敏度高，并可大量制备

【解析】

1、基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因—DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA—分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质—抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
2、单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。

（1）以RNA为模板合成DNA的过程称为逆转录。PCR技术可在体外大量扩增目的基因。PCR技术属于体外DNA复制过程，该过程需要脱氧核苷酸、ATP、引物、模板DNA以及Taq酶。

（2）以GP蛋白作为疫苗比基因疫苗更安全，其原因是GP蛋白自身没有感染力，但保留有抗原性，可引起机体产生特异性免疫，但不会致病。培育转基因动物时，应该以受精卵作为受体细胞；要使目的基因只在乳腺组织中表达，基因的首端必须含有使其特异性表达的乳腺蛋白基因的启动子；这种通过分泌乳汁来生产所需要的药品的转基因动物称为乳腺（房）生物反应器。转基因牛是否培育成功，可以通过抗原—抗体杂交技术从分子水平进行检测。

（3）制备单克隆抗体时，应该用经EBO免疫后小鼠的B淋巴细胞与鼠的骨髓瘤细胞进行融合；融合后的细胞需要通过两次筛选后才能得到所需要的细胞，其中第一次筛选的目的是为了得到杂交瘤细胞，第二次筛选的目的是为了得到能够产生针对EBO的杂交瘤细胞。单克隆抗体的特点是特异性强、灵敏度高，并可大量制备。