Question

回答下列（一）、（二）小题：

（一）某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料分离纯化乳酸菌。分离纯化所用固体培养基中因 含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。回答下列问题：

（1）泡菜腌制过程中起作用的主要是乳酸菌和____________。

（2）分离乳酸菌时，取适量的泡菜滤液用____________进行梯度稀释，进行稀释的理由是___________。与划线分离相比，该种分离方法的优点是___________。

（3）分离乳酸菌的培养基中加入碳酸钙的作用是____________和中和产生的乳酸。应挑选出___________的菌落作为候选菌。

（4）下列有关微生物培养的叙述正确的是__________

A．通常使用固体培养基对细菌进行扩大培养             B．若培养基需要调节 pH，应该在灭菌后进行

C．用显微镜直接计数固体培养基中微生物数量          D．培养过程中倒置平板可防止菌落被冷凝水冲散

（二）油菜籽中蛋白质和油脂的相对含量，与酶 1 和酶 2 对共同底物丙酮酸的竞争有关，酶 1促进蛋白质的合成，酶 2 促进油脂的合成。某研究小组得到了含有基因 A 的油菜。回 答下列问题：

（1）构建重组质粒时，将基因 A 与 Ti 质粒的控制质粒 DNA 转移的基因结合，这利用了该区 段可转移至受体细胞，并整合到受体细胞____________上的特性。

（2）为实现重组质粒的导入，一般情况下，需要用____________（物质）处理农杆菌。

（3）取田间生长的油菜下胚轴，先进行___________处理，然后接种到培养基中培养形成_______， 通过____________方法分散成单细胞，其依次经历____________、球形胚、心形胚和胚状体，最后再生出完整的植株。

（4）已知基因 A 转录的 mRNA 能与酶 1 基因转录的 mRNA 互补配对。与普通油菜相比较，含基因 A 的油菜籽粒中的油脂含量会显著____________。

Answer

假丝酵母 无菌水 在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的乳酸菌将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落 便于计数 利于乳酸菌的识别和分离 在平板上有溶钙圈 D 染色体DNA Ca2+（或CaCl2） 消毒 愈伤组织 液体悬浮培养 细胞团 提高

【解析】

1、泡菜的制作原理：泡菜的制作离不开乳酸菌。在无氧条件下，乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸。

2、接种微生物常用的两种方法：①平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。②稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。

3、据图分析可知，①表示将目的基因导入受体细胞，②是通过再分化产生含有基因A的油菜幼苗。

（一）（1）泡菜腌制过程中起作用的主要是乳酸菌和假丝酵母。

（2）分离纯化乳酸菌时，首先需要用无菌水对泡菜滤液进行梯度稀释；进行梯度稀释的理由是在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的乳酸菌将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。与划线分离相比，该种分离方法的优点是便于计数。

（3）在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用是中和乳酸菌代谢过程中产生的乳酸和利于乳酸菌的识别和分离；分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。因此，分离纯化时应挑选出在平板上有溶钙圈的菌落作为候选菌。

（4）A、通常使用液体培养基对细菌进行扩大培养，A错误；

B、若培养基需要调节pH，应该在灭菌前进行，B错误；

C、利用显微镜计数时只能用液体培养基，C错误；

D、倒置平板可防止培养基被滴落的冷凝水污染，D正确。

故选D。

（二）（1）构建重组质粒时，将基因 A 与 Ti 质粒的控制质粒 DNA 转移的基因结合，这利用Ti 质粒中的T-DNA可转移并整合到受体细胞染色体DNA上的特性。

（2）为实现重组质粒的导入，一般情况下，需要用Ca2+（或CaCl2）处理农杆菌。

（3）取田间生长的油菜下胚轴，先进行消毒处理，然后接种到培养基中培养形成愈伤组织， 通过液体悬浮培养方法分散成单细胞，其依次经历细胞团、球形胚、心形胚和胚状体，最后再生出完整的植株。

（4）已知转录时基因A的模板链与酶1基因的模板链互补。相对普通油菜，含基因A的油菜籽粒油脂含量显著提高，其机理是：基因A转录的mRNA与酶1基因转录的mRNA互补，阻碍了酶1基因的mRNA翻译，降低了酶1含量，酶2对丙酮酸的竞争增强，促进了油脂合成。