Question

回答下列（一）、（二）两小题

（一）大肠杆菌是生存在人体肠道中的正常菌群，每克粪便中含有10⁹个，且能够与致病菌混杂生长。如果食品和饮用水中出现大肠杆菌，就意味着食物可能被粪便污染而带上致病菌，因而常将大肠杆菌的数量作为食品卫生的检测指标之一。请据此回答下列问题：

（1）大肠杆菌异化作用的类型是________，大肠杆菌在肠道中一般对人无害，但如果进入人的___________，就会对人体产生危害。

（2）测定街边出售的奶茶中大肠杆菌的数目，常用涂布分离法进行测定。在操作过程中错误的是_______

A．将涂布器从70%酒精中取出后需放在酒精灯火焰上灼烧

B．涂布时需转动培养皿以使涂布均匀

C．每一浓度需设多个培养皿进行涂布

D．也可以利用划线分离法进行测定

（3）根据菌落测出的大肠杆菌数比实际数值要___(高、低)，原因是___________________。实验完成后需要对培养基进行_________处理，然后才能倒掉。

（二）动物细胞培养的过程是：

组织→单个细胞的悬浮液→原代培养→传代培养

（1）此过程的原理是_____________，将培养瓶放入____________培养。

（2）培养的条件除了充足的营养供给、适宜的温度和气体环境，还有____________。在培养的过程中_______（需要/不需要）再用胰蛋白酶。

（3）传代培养得到的细胞系具有_______性。关于细胞系和细胞株下列说法错误的是______

A．原代培养得到的细胞也可以是细胞系

B．细胞系是具有特殊性质的细胞株

C．连续细胞系都获得了不死性

D．连续细胞系不一定都发生了转化

Answer

兼性厌氧型 泌尿系统 D 低 培养基中可能有两个或多个细菌紧挨在一起，共同形成一个菌落 灭菌 细胞增殖 二氧化碳培养箱 无菌、无毒 需要 异质 D

【解析】

1、常用的微生物接种方法主要有平板划线法和稀释涂布平板法，两者都可以用于菌种的分离，后者还可以用于菌种的计数。

2、动物细胞培养条件：

（1）无菌、无毒的环境：①消毒、灭菌、②添加一定量的抗生素、③定期更换培养液，以清除代谢废物。
（2）营养物质：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质。
（3）适宜的温度和PH。
（4）气体环境：95%空气（细胞代谢必需的）和5%的CO2（维持培养液的PH）。
3、细胞株：原代培养细胞传至10代左右就不容易传下去，细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞能存活传到40～50代，这部分细胞称为细胞株。细胞系：细胞株传到50代左右不能再继续传代，部分细胞遗传物质改变，具有癌变细胞的特点，可以在培养条件下无限制的传代下去，这部分细胞称为细胞系。

（一）（1）人体的肠道是一个无氧环境，大肠杆菌可在人体的肠道内生存，也能在食品和饮用水中出现，说明大肠杆菌的异化作用类型为兼性厌氧型。大肠杆菌在肠道中一般对人无害，但如果进入人的泌尿系统，就会对人体产生危害。

（2）A、涂布器灭菌时，将涂布器从70%酒精中取出后在火焰上引燃待酒精燃尽后，然后在酒精灯火焰旁冷却8～10s再用，A正确；

B、涂布时，涂布器可以不动，可转动培养皿，使涂布均匀，B正确；

C、每一浓度需设多个培养皿进行涂布，最后求多个培养皿上菌落的平均值，使实验结果更准确，C正确；

D、划线分离法不能用于计数，D错误。

故选D。

（3）由于培养基中可能有两个或多个细菌紧挨在一起，共同形成一个菌落，所以根据菌落测出的大肠杆菌数比实际数值要低。实验完成后需要对培养基进行灭菌处理，然后才能倒掉，以防止微生物污染环境。

（二）（1）动物细胞培养的原理是细胞的增殖。二氧化碳培养箱是通过在培养箱箱体内模拟形成一个类似细胞/组织在生物体内的生长环境，所以动物细胞培养时需将培养瓶放入二氧化碳培养箱培养。

（2）培养的条件除了充足的营养供给、适宜的温度和气体环境，还有无菌、无毒的环境。由于细胞增殖过程中会出现接触抑制，所以在培养的过程中还需要再用胰蛋白酶处理，使组织细胞分散开。

（3）传代培养的细胞会发生变异，具有异质性。

A、动物组织经过机械消化或胰蛋白酶消化，可分散成单个的细胞；在细胞培养中，有原代培养和传代培养之分，传代培养得到的连续细胞系大多数具有异倍体核型，原代培养物在首次传代时就成为细胞系，A正确；

B、通过一定的选择或纯化方法，从原代培养物或细胞株中获得的具有特殊性质的细胞称为细胞系，B正确；

C、能连续培养下去的细胞系称为连续细胞系，其获得了不死性，C正确；

D、连续细胞系被认为是发生了转化的细胞系，D错误。

故选D。