Question

加试题回答下列（一）、（二）小题：

（一）下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tet^R表示四环素抗性基因，amp^R表示氨苄青霉素抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点。

据图回答：

（1）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用________限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含________的培养基上进行。

（2）能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是________（填字母代号）。

A．amp^R          B．启动子　　　　C．终止子         D．复制原点 

（3）过程①可采用的操作方法是_______(填字母代号)。

A．农杆菌转化     B．显微注射     C．大肠杆菌转化    D．细胞融合

（4）过程②采用的生物技术是______。

（5）对早期胚胎进行切割，经过程②可获得多个新个体。这利用了细胞的_____性。

（6）为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用_____（填字母代号）技术。

A．核酸分子杂交   B．基因序列分析  C．PCR          D．抗原—抗体杂交

（二）利用废弃的秸秆生产燃料乙醇，不仅缓解了资源危机、环境污染，同时更为可持续发展提供了保证。下面是利用玉米秸秆来生产乙醇的流程：

（1）从纤维素丰富的土壤中获取微生物1，进行一系列的操作后，用 _________ 将菌种涂布在相应的固体培养基中。

（2）下列有关涂布分离法的叙述错误的是_______

A．从土壤稀释液中取样时，不能只取悬液

B．接种时，涂布工具需先在酒精灯火焰上引燃

C．培养后菌落在整个平板表面分散均匀

D．涂布分离法比划线分离法更易获得单菌落

（3）为了提高生产效率，也可通过培养微生物1获得 ______________酶，并将该酶固定在某介质上制成固定化酶。  

（4）微生物2通常是_______________，为了确保获得产物乙醇，接种微生物2时要注意避免_____________，发酵时要注意_____________。这样得到的乙醇浓度不会很高，最高是_________，所以要对生产出来的乙醇经过蒸馏、提纯等加工，才可以得到浓度大于90%的燃料乙醇。

Answer

HindⅢ和BamHⅠ 氨苄青霉素 B B 胚胎移植技术 全能 D 玻璃刮刀 A 纤维素酶 酵母菌 杂菌污染 无氧 16%

【解析】

据题（一）图分析，根据目的基因两侧的限制酶和质粒上的限制酶种类分析，应该选择BamHⅠ、HindⅢ切割目的基因和质粒，且质粒上的四环素抗性基因被破坏，而氨苄青霉素抗性基因没有被破坏。图中过程①表示将目的基因导入受体细胞（动物细胞），常用显微注射法；过程②表示胚胎移植。

据题（二）图分析，微生物1将纤维素发酵产生葡萄糖，为纤维素分解菌；微生物2将葡萄糖发酵产生乙醇，为酵母菌。

（一）（1）根据以上分析已知，图中构建基因表达载体时，需要用HindⅢ和BamHⅠ同时酶切载体（质粒）和人乳铁蛋白基因（目的基因）；由于酶切后质粒上的四环素抗性基因被破坏，而氨苄青霉素抗性基因没有被破坏，因此筛选含有重组载体的大肠杆菌应该用含有氨苄青霉素的培养基。

（2）基因表达载体的结构包括目的基因（人乳铁蛋白基因）、启动子、终止子、标记基因、复制原点，其中启动子能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达，故选B。

（3）根据以上分析已知，过程①表示将目的基因导入受体细胞（动物细胞），常用显微注射法，故选B。

（4）根据以上分析已知，过程②表示胚胎移植技术。

（5）对早期胚胎进行切割，获得的多个小胚胎经过胚胎移植后发育为多个新个体，利用了细胞的全能性。

（6）人乳铁蛋白是目的基因（人乳铁蛋白基因）表达的产物，而检测目的基因在受体细胞中是否表达，常采用抗原-抗体杂交技术，故选D。

（二）（1）根据题意分析可知，对土壤中获取微生物1进行的是涂布分离法，稀释后应该用玻璃刮刀将菌种涂布在相应的固体培养基中。

（2）A、从土壤稀释液中取样时，应该取悬液进行涂布，A错误；

B、为了防止杂菌污染，接种时，涂布工具需先在酒精灯火焰上引燃，B正确；

C、培养后菌落在整个平板表面应该分散均匀，C正确；

D、涂布分离法比划线分离法更易获得单菌落，D正确。

故选A。

（3）通过培养微生物1获得纤维素酶，并将该酶固定在某介质上制成固定化酶，可以提高生产效率。

（4）根据以上分析已知，微生物2应该是酵母菌，其通过无氧呼吸产生乙醇，因此为了确保获得产物乙醇，接种酵母菌时要保证无菌（为了防止杂菌污染）、无氧的条件；这样得到的乙醇浓度不会很高，最高是16%。