Question

研究表明从母瘤分离脱落的癌细胞首先要与正常细胞粘附才能转移。为研究物质X对癌细胞与毛细血管内皮细胞间粘附的影响，请根据以下提供的实验材料与用具，完善实验思路，预测实验结果并进行分析与讨论。

材料与用具：培养瓶若干个、液体培养基、物质X、癌细胞细胞株、内皮细胞悬液、CO₂培养箱、PBS溶液（用于洗去未粘附的细胞）

（要求与说明：不考虑培养液成分变化对培养物的影响；实验条件适宜）

（1）实验思路：

①取培养瓶若干个均分为三组，分别加入等量且适量的液体培养基和内皮细胞悬液，置于37℃的CO₂培养箱中培养24h，使培养瓶中铺满单层内皮细胞。

②_____。

③同时分别_____。置于37℃的CO₂培养箱中培养一段时间。

④用PBS溶液洗去未贴壁的细胞，测定相关值并计算细胞粘附率。

⑤对实验数据进行分析与处理。

（2）下图为实验所测得的细胞粘附率，请根据图示结果，用文字描述该实验结果并得出实验结论：

结果：_____。

结论：_____。

（3）分析与讨论

①实验用的癌细胞细胞株可以通过_____法建立。获取癌细胞时需用_____处理癌细胞株，将癌细胞转入含内皮细胞的培养瓶后所进行的培养称为_____培养。

②导致癌细胞从母瘤分离脱落的原因可能是_____。根据实验可推测：物质X可能是通过减少肿瘤细胞与毛细血管内皮细胞的粘附率，来达到_____的作用。

Answer

加入用液体培养基配制的不同浓度的物质X（浓度为100和300μg/ml），对照组加入等体积的液体培养基 取等量的癌细胞转入上述培养瓶中（取等量的癌细胞转入铺满单层内皮细胞的培养瓶中） 与正常对照组相比，加入物质X后，癌细胞与内皮细胞间的粘附率明显降低，同时随着剂量越高，癌细胞与内皮细胞间的粘附率下降越明显。 物质X可降低癌细胞与内皮细胞间的粘附率。（而且作用效果与物质X的浓度有关） 克隆培养 胰蛋白酶 传代 癌细胞膜表面粘连蛋白（糖蛋白）减少 抑制癌细胞转移

【解析】

1、本实验的目的是为了研究不同浓度的物质X对癌细胞与毛细血管内皮细胞间粘附的影响，因此自变量是不同浓度放入物质X溶液，因变量是细胞粘附率，其余均为无关变量。

2、实验设计应该遵循对照原则和单一变量原则，此外还应该遵循平行重复原则，这样可以减小实验的误差。

（1）实验思路：根据分析该实验的自变量和因变量，所以在步骤②中设计自变量。

②加入用液体培养基配制的不同浓度的物质X（浓度为100和300μg/ml），对照组加入等体积的液体培养基。

③同时分别取等量的癌细胞转入上述培养瓶中（取等量的癌细胞转入铺满单层内皮细胞的培养瓶中）。置于37℃的CO2培养箱中培养一段时间。

（2）结果：与正常对照组相比，加入物质X后，癌细胞与内皮细胞间的粘附率明显降低，同时随着剂量越高，癌细胞与内皮细胞间的粘附率下降越明显。

结论：物质X可降低癌细胞与内皮细胞间的粘附率。（而且作用效果与物质X的浓度有关）。

（3）分析与讨论：

①实验用的癌细胞细胞株可以通过克隆培养法建立。获取癌细胞时需用胰蛋白酶，将其分散成单个细胞，将癌细胞转入含内皮细胞的培养瓶后所进行的培养称为克隆培养。

②导致癌细胞从母瘤分离脱落的原因可能是癌细胞膜表面粘连蛋白（糖蛋白）减少。根据实验可推测：物质X可能是通过减少肿瘤细胞与毛细血管内皮细胞的粘附率，来达到抑制癌细胞转移的作用。