Question

为研究“某品牌酸奶中乳酸菌数量及其对抗生素耐药性情况”某同学进行了如下实验：

请分析回答下列问题：

（1）配制的细菌培养基除了含有水、碳源、氮源和无机盐等主要营养成分外，还应加入适量的_______和琼脂。在培养基各成分溶化与灭菌之间，要进行的操作是_______。

（2）接种微生物的方法有很多，图中过程①②③所示的方法为_______________。用该方法统计样本菌落数时，同时需要做A、B、C三个培养皿，原因是_________________。用该方法统计样本菌落数后，所得数据需要乘以10ⁿ后，才可表示乳酸菌的数量（单位：个/ml），这里的n=_____________（4或5或6）。经正确操作培养后，3个平板上的菌落数分别为150、158和157。据此可得出每毫升样品中的活菌数_______（填“至多”或“至少”）为________个。

（3）请完善“检测乳酸菌对青霉素、四环素耐药性”的实验操作步骤：

步骤1：分别取______________________________加入三组无菌培养皿中，再加入灭菌并冷却到50°C左右的培养基，立即混匀，静置凝固成平板。

步骤2：向三组培养基中分别接种待检测的乳酸菌菌种。

步骤3：将接种后的三组培养基和一个________都置于适宜温度等条件下培养一定时间，观察比较培养基中菌落生长情况。

Answer

维生素 调pH 稀释涂布平板法 分别计数3次取平均值，使实验结果更加准确可靠 6 至少 1.55×108 等量的且适量的青霉素、四环素、无菌水 未接种的培养基

【解析】

分析图解可知，图示过程为微生物分离与纯化过程中的稀释涂布平板法，即将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

（1）配制的细菌培养基除了含有水、碳源、氮源和无机盐等主要营养成分外，还应加入适量的维生素和琼脂。在培养基各成分溶化与灭菌之间，要先调pH。

（2）接种微生物的方法有很多，图1中过程①②③所示的方法为稀释涂布平板法，用该方法统计样本菌落数时，同时需要做A、B、C三个培养皿，分别计数3次，取平均值，使实验结果更加准确可靠。分析图解可知，图中酸奶样品总共稀释105倍，并且稀释涂布平板时只取了0.1ml，因此这里的n=6。3个平板上的菌落数分别为：150、158和157，据此可得出每升样品中的活菌数至少为（150+158+157）÷3÷0.1×105=1.55×108个。

（3）步骤1：根据等量原则，应该分别取等量的青霉素、四环素和无菌水加入三组无菌培养皿中。步骤3：根据对照原则，应该将接种后的三组培养基和一个未接种的培养基都置于适宜温度等条件下培养若干天作为对照试验。