Question

下图是从酵母菌获取某植物需要的某种酶基因的流程，结合所学知

识及相关信息回答下列问题：

（1）图中cDNA文库           基因组文库（填“大于”、“等于”或者“小于”）。

（2）①过程提取的DNA需要       的切割，B过程是                。

（3）为在短时间内大量获得目的基因，可用            扩增的方法。目的基因获取之后，需要进行                    ，其组成必须有             以及标记基因等，此步骤是基因工程的核心。

（4）将该目的基因导入某双子叶植物细胞，常采用的方法是         ，其能否在此植物体内稳定遗传可以用          技术进行检测。

Answer

（1）小于 （2）限制酶 反转录

（3）PCR技术 基因表达载体的构建 启动子、终止子、目的基因（复制原点可不答）

（4）农杆菌转化法 DNA分子杂交

【解析】

1、基因文库是指将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入到受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因。包括基因组文库（包含某种生物所有的基因）和部分基因文库（包含某种生物的部分基因，如cDNA文库）。

2、PCR技术扩增目的基因（适用于目的基因的核苷酸序列已知的情况）。PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术，其原理是DNA复制，需要模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶），以指数的方式扩增，即约2n。

3、基因表达载体的构建是基因工程的核心。目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在并且可以遗传给下一代并表达和发挥作用。基因表达载体的组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因。

4、将目的基因导入受体细胞，如受体细胞是植物细胞，常用农杆菌转化法（约80%的转基因植物都是用这种方法获得的），具体过程：目的基因插人Ti质粒的T-DNA上→农杆菌→导入植物细胞→目的基因整合到植物细胞染色体上→目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达。另外，还可用基因枪法和花粉管通道法；如果受体细胞是动物细胞，常用显微注射技术；如果受体细胞是微生物细胞，用Ca2+处理细胞→感受态细胞→表达载体与感受态细胞混合（在缓冲液中）→一定温度下，感受态细胞吸收DNA分子，完成转化。

（1）基因组文库是指将某生物的全部基因组DNA切割成一定长度的DNA片段克隆到某种载体上形成的集合；而cDNA文库是由mRNA经逆转录形成的基因组成的，由于基因的选择性表达，所以来自所以cDNA文库小于基因组文库。

（2）从供体细胞中的DNA中获取目的基因，首先应用限制酶将目的基因从其所在的DNA分子上切割下来；B过程是以mRNA为模版来合成DNA的，应为反转录（或逆转录）过程。

（3）PCR技术是一种体外扩增DNA的方法，其原理为DNA复制，能将得到的目的基因在细胞外大量扩增；目的基因获取之后，需要进行基因表达载体的构建；其组成必须有目的基因、启动子和终止子以及标记基因等，此步骤是基因工程的核心。

（4）将目的基因导入某双子叶植物细胞常采用的方法是农杆菌转化法，目的基因只有整合到植物细胞的染色体上才能在植物体内稳定遗传，可通过DNA分子杂交的方法对目的基因是否整合到染色体上进行检测。