Question

回答下列（一）、（ニ）两小题。

（一）请回答酿酒、泡菜腌制、泡菜汁中嗜盐微生物分离实验以及亚硝酸盐测定的有关问题。

（1）家庭酿制米酒时，将米饭与酒曲混合装坛约占______的空间。酒曲中含有的曲霉可将米饭中的营养物质水解，从而有利于酵母菌进行细胞呼吸，请列举出酒曲中可能存在的酶(至少2种)：____________。

（2）泡制过程中起主要作用的微生物是_________和__________。

（3）分离计数嗜盐微生物所用的接种工具是__________。根据培养基的用途，分离实验选用___________。判断该培养基是否起了作用，需要设置的对照组是____________。

A．未接种的该培养基       B．未接种的LB培养基 

C．接种了的LB培养基      D．接种了的该培养基

（4）测定亚硝酸盐含量时，对25g样品进行适当处理后定容至500mL，取10 mL样品溶液显色后，用光程为1cm的________在550nm处测定光密度值，绘制以亚硝酸盐质量为横坐标，以光密度值为纵坐标的_______

（二）2012年诺贝尔生理学或医学奖授予在“体细胞重编程”领域做出贡献的科学家，如图是将鼠的皮肤细胞“重新编程”为多功能干细胞，再导入早期胚胎，植入代孕鼠，产出嵌合体鼠的过程。请回答下列有关问题：

（1）4个关键基因(山中因子)作为______________通过逆转录病毒转入小鼠的皮肤细胞内，使其转变成iPS细胞。在该技术中，逆转录病毒是这4个关键基因的________，在其协助下4个基因进入细胞内，并整合到其染色体的_______上。

（2）培养iPS细胞时，培养液需要特别加入的天然成分是________，iPS细胞通过________(填字母)方法注入早期胚胎中。

A．细胞融合  B．显微注射　C．胚胎移植  D．核移植

（3）早期胚胎通常要培养到________才能进行移植，要使一个早期胚胎最终形成若干个基因型相同的嵌合体鼠，需要采用________的技术。

Answer

2/3 淀粉酶、糖化淀粉酶、蛋白酶等 假丝酵母 乳酸菌 玻璃刮刀 选择培养基（或者高盐的LB培养基） C 比色杯 标准曲线 目的基因 载体 DNA 动物血清(或胎牛血清) B 8细胞以上(或桑椹胚或囊胚) 胚胎分割

【解析】

1、测定亚硝酸盐含量是利用光电比色法，对比待测溶液和标准溶液的吸光度来测定待测溶液的浓度。利用亚硝酸盐在盐酸酸化下与对氨基苯磺酸发生重氮反应后，与N-1-萘基乙二胺盐酸结合形成玫瑰红色，该样品的吸光度是比较待测溶液中亚硝酸盐含量的标准。

2、基因工程中的运载体：常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒。

3、胚胎干细胞简称ES或EK细胞，来源于早期胚胎或原始性腺（即囊胚期的内细胞团）。特点：具有胚胎细胞的特性，体积较小，细胞核大，核仁明显；在功能上，具有发育的全能性，可分化为成年动物任何一种组织细胞。另一方面，在体外培养条件下，ES细胞可不断增殖而不发生分化，可进行冷冻保存，也可以进行某些遗传改造。

（一）（1）酵母菌属于兼性厌氧型生物，家庭酿制米酒时，将米饭与酒曲混合装坛约占2/3的空间，酒曲中含有的曲霉可将米饭中的营养物质水解，从而有利于酵母菌进行细胞呼吸，同时酒曲中还含有蛋白酶、淀粉酶等。

（2）假丝酵母菌和乳酸菌在泡菜在腌制过程中起主要作用。

（3）分离计数嗜盐微生物所用的接种工具是玻璃刮刀；该实验需要分离嗜盐微生物，故分离培养基应当选用含盐量高的选择培养基，同时用接种了的LB培养基判断是否起到了筛选作用。

（4）由于亚硝酸盐在盐酸酸化下与对氨基苯磺酸发生重氮反应后，与N-1-萘基乙二胺盐酸结合形成玫瑰红色，故测定亚硝酸盐含量采用光电比色法，样品需要放在1cm比色杯中测定，在绘制曲线时，以光密度值为纵坐标的标准曲线。

（二）（1）目的基因主要指编码蛋白质的基因，结合题意可知，山中因子在基因工程中指目的基因，基因工程中常用病毒作为运载体，在其协助下4个基因进入细胞内，并整合到其染色体的DNA上。

（2）将目的基因导入动物细胞的方法是显微注射法，由于早期胚胎培养动物血清中含有细胞生长所必需的物质，所以在体外培养胚胎时需要加入动物血清。

（3）早期胚胎通常要培养到桑椹胚或囊胚阶段才能进行移植，要使一个早期胚胎最终形成若干个基因型相同的嵌合体鼠，需要采用胚胎分割技术。