Question

将人IL-12基因表达载体导入T细胞，可促进T细胞的增殖分化，促进淋巴因子分泌，增强效应T细胞的杀瘤活性。回答下列问题：

（l）体外采用PCR技术扩增IL-12基因时，依据的原理是____，该技术使用Taq酶而不使用细胞DNA聚合酶的主要原因是____。

（2）构建的IL-12基因表达载体的组成有IL-12基因、复制原点_____（至少答2点）等，将其导入T细胞常采用的方法是____。

（3）检测IL-12基因在T细胞中是否翻译出IL-12蛋白，可采用____，若出现____，则成功翻译。

（4）研究表明：正常机体T细胞导入IL-12基因表达载体后，抗体的数量明显增多。原因是________

Answer

DNA（双链）复制 Taq酶热稳定性高，而细胞DNA聚合酶在高温下会失活 启动子、终止子、标记基因 显微注射法 抗原一抗体杂交 杂交带 正常机体T细胞导入IL–12基因表达载体后，T细胞分泌淋巴因子增多，促进B细胞增殖、分化为浆细胞的能力增强，从而产生更多的抗体

【解析】

基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因—DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA—分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质—抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）PCR扩增目的基因利用的是DNA双链复制的原理，该过程利用的Taq酶热稳定性高，而细胞DNA聚合酶在高温下会失活。

（2）基因表达载体的组成有lL–12基因、复制原点、启动子、终止子、标记基因等，将其导入T细胞等动物细胞常采用的方法是显微注射法。

（3）检测IL–12基因是否导入、转录和翻译分别用DNA分子杂交技术、分子杂交技术、抗原-抗体杂交技术，若出现杂交带，则说明翻译成功。

（4）正常机体T细胞导入IL–12基因表达载体后，促进T细胞分泌淋巴因子，而淋巴因子分泌增加，促进B细胞增殖、分化为浆细胞的能力增强，从而产生更多的抗体。