Question

下图是转基因猕猴培养过程示意图，请据图回答：

（1）获取绿色荧光蛋白基因的方法包括____________、利用 PCR 技术扩增和用化学方法 直接人工合成等。基因工程的核心步骤是________________________用图中数字表示），②过程常用的方法是________________________________________________。

（2）从分子水平检测目的基因是否成功导入受体细胞的方法是__________________ 技术。

（3）利用 PCR 技术扩增目的基因的前提是要有一段已知的目的基因核苷酸序列，根据这 一序列设计并合成________________________________________________。

（4）从雌性猕猴体内采集的卵母细胞，一般要培养到____________ 阶段才能进行体外受 精。判断卵子受精的重要标志是____________________________________。

（5）图中过程⑦称为____________ ，所用的早期胚胎通常是发育至____________ 期的胚 胎，受体雌猴对移入子宫的外来胚胎不会发生 ____________反应，这为胚胎在受体雌猴体 内的存活提供了可能。

Answer

从基因文库中获取 ① 显微注射法 DNA分子杂交 （成对的）引物 减数第二次分裂中期（MⅡ中期） 在卵细胞膜和透明带的间隙可以观察到两个极体 胚胎移植 囊胚（或桑椹胚） 免疫排斥

【解析】

图示为转基因猕猴的培育过程示意图。标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。

基因工程技术的基本步骤：目的基因的获取→基因表达载体的构建→将目的基因导入受体细胞→目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因用DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA用分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质用抗原—抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

PCR是聚合酶链式反应的缩写，其扩增目的基因的原理是： DNA半保留复制的原理。扩增目的基因的前提是：要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成（成对的）引物。反应需要：模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶）。

胚胎移植，又称受精卵移植，是指将雌性动物的早期胚胎，或者通过体外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同种的、生理状态相同的雌性动物体内，使之继续发育为新个体的技术。相关技术包括：同期发情、超数排卵、胚胎的收集和移植（卵母细胞的体外成熟、精子的体外获能、体外受精、受精卵的体外培养和移植等一系列步骤）。

（1）绿色荧光蛋白基因为目的基因，获取目的基因的方法包括：从基因文库中获取目的基因、利用PCR技术扩增目的基因和用化学方法直接人工合成等；基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建，即图示中的①过程。②过程是将目的基因导入受精卵这一受体细胞，常用的方法是显微注射法；

（2）目的基因的检测与鉴定分为分子水平上的检测和个体水平上的鉴定。分子水平检测目的基因是否成功导入受体细胞的方法是DNA分子杂交技术；

（3）PCR扩增目的基因的前提是：要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成（成对的）引物。

（4）受体细胞常选处在MⅡ中（减数第二次分裂中）期的去核卵母细胞，通过电脉冲（或电刺激）进行激活，使其完成减数分裂和发育进程；受精过程包括5个阶段：1、精子穿过放射冠 2、精子穿过透明带 3、精子进入卵黄 4、原核形成 5、配子融合。是否完成受精的标志是：在卵黄膜和透明带的间隙可以观察到二个极体；

（5）图中过程⑦为胚胎移植，所用的早期胚胎通常是发育至桑椹胚或囊胚期的胚胎，由于胎盘屏障等原因，受体雌猴对移入子宫的外来胚胎不会发生免疫排斥反应，这为胚胎在受体雌猴内的存活提供了可能。