Question

为了培育高效利用木糖发酵产乳酸的菌株，科研人员将能利用木糖产乳酸的菌种搭载于中国“实践八号”育种卫星，卫星返回后进行筛选，其主要流程如下图，其中乳酸能溶解培养基中的碳酸钙形成透明圈。请回答：

（1）与步骤②相比，步骤③的培养基成分还含有_______、______。两培养基均以木糖作为唯一碳源的目的是________。

（2）步骤③中，应在________附近倒平板，不采用涂布接种的原因是_________。平板在适宜条件下培养一段时间后，筛选有透明圈的菌落作为候选菌。

（3）科研人员从候选菌中初步筛选出产乳酸能力较强的四种菌株，再通过连续转接和液体发酵进行遗传稳定性检测，得到下表所示结果（单位：g·L^-1），最终确定卫10为最优菌株，依据是________。

传代次数	菌株
卫10	卫32	卫56	卫69
2	70．78	71．23	70．52	69．24
5	70．23	69．52	67．46	65．65
8	69．58	62．16	60．52	61．53
11	70．75	55．69	52．42	55．72
14	69．42	42．28	40．22	44．38

（4）若要进一步探究卫10发酵的最适木糖浓度，试写出实验思路：________。

Answer

琼脂 碳酸钙 筛选出高效利用木糖产乳酸的菌株 （酒精灯）火焰 乳酸菌是厌氧微生物，不能在培养基表面生长繁殖 随传代次数的增加，产生乳酸的量能保持稳定 配制不同木糖浓度的培养基进行发酵，测定、比较不同木糖浓度下的产乳酸能力，产乳酸能力最强的木糖浓度就是菌体发酵产乳酸的最佳木糖浓度

【解析】

1、无菌操作，包括灭菌和消毒两种方式，消毒的方法有巴氏消毒法、酒精消毒、煮沸消毒法；灭菌的方法有干热灭菌、灼烧灭菌和高压蒸汽灭菌；

2、微生物的接种：微生物接种的方法很多，最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，常用来统计样品活菌数目的方法是稀释涂布平板法。

3、平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。

（1）步骤②是在液体培养基中扩大培养，步骤③是在平板培养基中分离培养，故其培养基成分还需加琼脂和碳酸钙。两培养基均以木糖作为唯一碳源是为了筛选出高效利用木糖产乳酸的菌株。

（2）为了防止杂菌污染，应在火焰附近倒平板。由于乳酸菌是厌氧微生物，不能在培养基表面生长繁殖，故不采用涂布接种。

（3）根据实验结果可知，随传代次数的增加，卫10产生乳酸的量能保持稳定，最终确定卫10为最优菌株。

（4）若要进一步探究卫10发酵的最适木糖浓度，可以配制不同木糖浓度的培养基进行发酵，测定，比较不同木糖浓度下的产乳酸能力，产乳酸能力最强的木糖浓度就是菌体发酵产乳酸的最佳木糖浓度。