Question

我国目前临床使用的乙肝疫苗大多为基因工程疫苗，其有效成分是一种叫做乙肝表面抗原的蛋白质（S蛋白），对应的基因为s基因。请回答：

（1）在构建重组DNA分子时，要用限制性核酸内切酶处理___________________，并用______________酶使两者结合。将重组DNA分子通过_________的方式导入到哺乳动物细胞，经筛选得到工程细胞。

（2）在细胞培养过程中，通常需要加入_______等天然成分。工程细胞在生长过程中有_________________现象，需要定期使用________酶处理，以便于分瓶培养。

（3）由于哺乳动物细胞培养较难，成本较高，近些年科学家们又发明了“乳腺生物发生器”，进而从转基因动物的乳汁中提取所需产品。在这种技术中，作为重组DNA分子受体细胞的一般是______________。

Answer

s基因和载体DNA DNA连接 显微注射 血清 接触抑制、贴壁生长 胰蛋白 受精卵

【解析】

本题考查基因工程和细胞工程的相关知识，要求考生识记基因工程的概念、操作工具及操作步骤；识记动物细胞培养的过程及条件，能结合所学的知识准确答题。动物细胞培养的过程：取动物组织块→剪碎组织→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养液中（原代培养）→放入二氧化碳培养箱培养→贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液→转入培养液（传代培养）→放入二氧化碳培养箱培养。

动物细胞培养的条件：
（1）无菌、无毒的环境：①消毒、灭菌；②添加一定量的抗生素；③定期更换培养液，以清除代谢废物。
（2）营养物质：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质。
（3）温度和PH：36.5℃±0.5℃；适宜的pH：7.2～7.4。
（4）气体环境：95%空气（细胞代谢必需的）和5%的CO2（维持培养液的pH）。

（1）在构建重组DNA分子时，要用限制性核酸内切酶处理s基因和载体DNA，并用DNA连接酶使两者结合。将重组DNA分子导入到哺乳动物细胞使用显微注射技术。
（2）在细胞培养过程中，通常需要加入血清等天然成分。在动物细胞培养过程中存在接触抑制、贴壁生长现象，需要定期使用胰蛋白酶处理，以便于分瓶培养。
（3）培育转基因动物时，应该以受精卵作为受体细胞，因为受精卵的全能性最高。