Question

国家863计划项目“利用崂山奶山羊乳腺生物反应器制备药用蛋白”取得重大进展。目前，已经成功获得经纯化的抗凝血酶Ⅲ蛋白，达到国际先进水平。下面是制作崂山奶山羊乳腺生物反应器的流程图：

（1）根据流程图分析，动物乳腺生物反应器主要利用了_____________技术(至少写2种)。

（2）要实现①超数排卵，应在崂山奶出羊A发情期的某一阶段用________处理，然后收集卵子。

（3）过程④需将抗凝血酶Ⅲ基因注入受精卵内，在显微镜下判断卵子是否受精的标志是_____________________________。

（4）要使人的抗凝血酶Ⅲ基因在山羊乳腺细胞中特异性表达，在⑤之前要提取囊胚期的_____________________细胞，采用检测___________________技术对其____________________和__________________进行检测。

（5）若要一次获得多只完全相同的转基因崂山奶山羊D，⑤应采用___________技术。

Answer

转基因（DNA重组技术）、动物细胞培养 、早期胚胎培养、胚胎移植 促性腺激素 在卵细胞膜和透明带的间隙观察到两个极体 滋养层 DNA分子杂交 性别 是否含有目的基因 胚胎分割

【解析】

图中①卵母细胞的采集和培养，②表示精子的采集和获能，然后通过体外受精形成受精卵；③表示基因表达载体的构建，④表示目的基因导入受体细胞。图中受体细胞为受精卵，受精卵通过早期胚胎培养然后经过⑤胚胎移植技术移植到代孕奶山羊中，获得转基因羊。

（1）从图解中可以看出，动物乳腺生物反应器的获得经历了体外受精、动物细胞培养 、早期胚胎培养、胚胎移植、重组DNA技术等过程，涉及到大技术手段有基因工程、胚胎工程和细胞培养技术等。

（2）卵细胞的采集方法：用促性腺激素处理，使其排出更多的卵子，然后，从输卵管中冲取卵子。

（3）精子入卵后形成一个雄原核，与此同时，精子入卵后被激活的卵子完成减数第二次分裂，排出第二极体后形成雌原核，并在在卵黄膜和透明带的间隙观察到两个极体。

（4）要使人的抗凝血酶III基因在山羊乳腺细胞中特异性表达，在⑤之前要提取囊胚期的滋养层的细胞，要检测受体细胞是否为雌性，以及目的基因是否被成功转入，其检测方法是DNA杂交技术。

（5）一次获得多只完全相同的转基因崂山奶山羊D，可用胚胎分割技术。