Question

回答下列（一）、（二）小题：

（一）回答生物技术实践的相关问题：

（1）醋酸菌如果在__________充足、氧气充足的情况下，可以直接将葡萄糖变成醋酸；由于醋化醋杆菌不能直接利用淀粉等多糖类，所以，淀粉需要_________过程才能用来制醋，为了提高产量，往往筛选高产菌株，筛选出的高产菌株使用_________（工具）接种到___________上，放置于4 ℃的冰箱内进行保存备用。在酿醋前，将菌种放在锥形瓶内进行震荡培养，可用_____________进行搅拌；

（2）植物的组织培养是快速繁殖的一种方法，将剪下的部分枝条先放在发芽培养基中培养，使之长出更多的_____________，再进行____________培养后移入生根培养基中，待生根后，将幼苗移至____________中进行锻炼

（二）已知拟南芥植物多次培养后依然具有全能性，常用拟南芥进行多方面的研究和应用，原生质体培养就是常用的技术之一

（1）原生质体的制备：选取生长到3-4周的拟南芥叶片，先用70%的酒精消毒后，用________冲洗5次，将叶片切成0．5-1mm的小片放置于盛有_____________的培养皿中，另取一培养皿，加入_________灭菌后的酶液，将叶片放入酶液，震荡酶解3小时，酶解后过滤出大组织块，滤液中是酶和原生质体混合物，将滤液可以通过______________方法进行分离。影响原生质体纯度的因素有_____________________________（写2种）

（2）筛选出具有活性的原生质体，可将处理后的目的基因通过_______________法导入到受体细胞，原生质体只有再生出________________后才能进行细胞增殖，拟南芥的全能性的表达程度主要取决于该植物的____________。

Answer

糖源 糖化（水解） 接种环 斜面 磁力搅拌器 丛状苗 分株 草炭土或蛭石 无菌水 （0．5—0，6mol/L的）甘露醇 过滤 离心 细胞的生长状况、酶的作用时间、酶的浓度、离心时间、离心强度等 显微注射 细胞壁 基因型

【解析】

植物组织培养指的是在无菌的情况下，将植物体内的某一部分器官或组织，如茎尖、芽尖、形成层、根尖、胚芽和茎的髓组织等从植物体上分离下来，放在适宜培养基上培养，经过一段时间的生长、分化最后长成一个完整的植株，属于无性生殖。高等植物原生质体制备一般是用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁，获得植物的原生质体。

（一）（1）醋酸菌在缺少糖原时，将酒精变成乙醛，再将乙醛变成醋酸；醋酸菌在氧气、糖原充足时，可以将葡萄糖直接转变成醋酸。利用大米、高粱等富含淀粉的原料制醋，需增加将淀粉水解成糖的过程。菌株的临时保存常用接种环接种到试管的固体斜面培养基上进行4℃冰箱保存备用。在酿醋前，将菌种放在锥形瓶内进行震荡培养，可用磁力搅拌器进行搅拌。

（2）在植物组织培养过程中，将剪下的枝条放在发芽培养基中培养长出丛状苗，然后进行分株培养继续移植生根培养基，生根长出幼苗后，将幼苗移植到经过消毒的草炭土或蛭石等环境下生活一段时间，等幼苗长壮后再移栽到土壤中。

（二）（1）植物原生质体的制备过程：将消毒后的外植体用无菌水冲洗5次，再将离体的叶片切成0.5-1mm的小片放置于盛有0.5-0.6mol/的甘露醇（较高渗透压）下用过滤灭菌后的纤维素酶和果胶酶混合液酶解得到酶和原生质体的混合滤液，再将滤液进行离心处理便可。影响原生体质纯度的因素很多，如细胞的生长状况、酶的作用时间、酶的浓度、离心时间、离心强度等等。

（2）将外源目的基因导入受体细胞（包括原生质体受体）中，可通过显微注射将不同来源的遗传物质进行重新整合。原生质体只有再生出细胞壁后才能继续增殖，拟南芥的全能性的表达程度主要取决于该植物的基因型。