Question

人体内的t-PA蛋白能高效降解由血纤维蛋白凝聚而成的血栓，是心梗和脑血栓的急救药。

（1）为心梗患者注射大剂量的基因工程t-PA会诱发颅内出血。研究证实，将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，能显著降低出血副作用。据此，先对天然的t-PA基因进行改造，再采取传统的基因工程方法表达该突变基因，可制造出性能优异的t-PA突变蛋白，该工程技术称为__________。

（2）若获得的t-PA突变基因如图所示，那么质粒pCLY11需用限制酶__________和__________切开，才能与t-PA突变基因高效连接。

（3）将连接好的DNA分子导入大肠杄菌中，对大肠杆菌接种培养。在培养基中除了加入水、碳源、氮源等营养物质外，还应加入__________进行选择培养，以筛选成功导入pCLY11的细菌。配置好的培养基通常采用__________法进行灭菌。

（4）对培养得到的菌落进行筛选，其中菌落为__________色的即为含t-PA突变基因重组DNA分子的大肠杆菌。得到的大肠杆菌能否分泌t-PA突变蛋白，可通过该细胞产物能否与__________特异性结合进行判定。

Answer

蛋白质工程 XmaI BglII 新霉素 高压蒸汽灭菌法 白 t-PA蛋白抗体

【解析】

本题考查基因工程和蛋白质工程的相关知识。基因工程的基本操作步骤：获取目的基因→构建基因表达载体→导入受体细胞→得到转基因生物→目的基因检测与鉴定。蛋白质工程可以通过基因修饰或基因合成，对现有的蛋白质进行改造，或制造新的蛋白质以满足人类的生产和生活的需求。

（1）对天然的t-PA基因进行改造，以制造出性能优异的t-PA突变蛋白的技术称为蛋白质工程；

（2）如图所示，由于目的基因的两端的碱基序列分别是CCGG、CTAG ，所以应用XmaI和BglII两种限制酶切割，以便于把目的基因连接到质粒pCLY11上；

（3）由图1可知，将连接好的DNA分子导入大肠杆菌中，含t-PA突变基因重组DNA分子的细胞具有新霉素抗性，在培养基中应加入新霉素进行选择培养，以筛选成功导入pCLY11的细菌。配置好的培养基通常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌；

（4）由于限制酶切割质粒破坏了mlacZ基因，所以含t-PA突变基因重组DNA分子的细胞所长成的菌落呈白色。检查t-PA突变蛋白可用t-PA抗体，观察能否发生特异性结合进行判定。