Question

圆褐固氮菌能将大气中的氮气转化为氨，是异养需氧型的原核生物。某同学利用稀释涂布平板法从土壤中分离获得圆褐固氮菌。回答下列问题。

（1）圆褐固氮菌与硝化细菌在同化作用过程上的最主要区别在于圆褐園氮菌_____。培养圆褐固氮菌时不能隔绝空气，其原因是__________(答出两点)。

（2）稀释涂布平板法常用来统计样品中活菌的数目，分离不同的微生物需要不同的稀释倍数，原因是_______________________________________________。

（3）工作者将三个接种了等量同样稀释倍数培养液的培养基置于37°C的恒温箱中培养。24h后观察到三个平板上的菌落数目分别为19、197、215，该结果出现的可能原因是__________________。为获得更科学的三个平板上的数据，请提出解决方案：________________________。

（4）若用固定化酶技术固定圆褐固氮菌产生的固氮酶，和一般酶制剂相比，其优点是_________，且利于产物的纯化；固定化目的菌细胞常用______法固定化。

Answer

不能将CO2转化为含碳有机物 圆褐固氮菌为需氧型生物，且其需要空气中的氮气作为氮源 (单位质量)土壤中不同种类的微生物数量不同 涂布第一个平板时涂布器未冷却就涂布平板 重做实验 可重复利用；既能与反应物接触，又能与产物分离 包埋

【解析】

稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。此法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数。一般用于某些成品检定（如杀虫菌剂等）、生物制品检验、土壤含菌量测定及食品、水源的污染程度的检验。

（1）硝化细菌属于自养型细菌，可以利用化学反应放出的能量将CO2还原为糖类。圆褐固氮菌能将大气中的氮气转化为氨，是异养需氧型的原核生物。圆褐固氮菌与硝化细菌在同化作用过程上的最主要区别在于圆褐園氮菌不能将CO2转化为含碳有机物。培养圆褐固氮菌时不能隔绝空气，其原因是圆褐固氮菌为需氧型生物，且其需要空气中的氮气作为氮源。

（2）稀释涂布平板法常用来统计样品中活菌的数目，(单位质量)土壤中不同种类的微生物数量不同，因此分离不同的微生物需要不同的稀释倍数。

（3）三个平板上的菌落数目分别为19、197、215，19这个结果特别少偏离正常，该结果出现的可能原因是涂布第一个平板时涂布器未冷却就涂布平板。因为含有19这个异常数据，为获得更科学的三个平板上的数据，只能重做实验。

（4）固定化酶是将水溶性酶用物理或化学方法处理，使之成为不溶于水的，但仍具有酶活性的状态的一种技术。一般酶制剂和产物混合在一起，难分离，且再次利用变得困难，固定化酶技术固定圆褐固氮菌产生的固氮酶，其优点是可重复利用；既能与反应物接触，又能与产物分离，且利于产物的纯化。目的菌体积较大，固定化目的菌细胞常用包埋法固定化。