Question

回答下列（一）、（二）小题：

（一）回答与胴腐病防治有关的问题：

果树的胴腐病是由某真菌引起的疾病，某中学的科研小组计划分离出该真菌做药物防治实验，为胴腐病的防治提供合理的建议，实验时使用的PDA培养基配方如下表所示：

物质	马铃薯	葡萄糖	自来水	氯霉素
含量	200g	20g	1000mL	0．3g

（该真菌在PDA培养基上生长时有特定的形态特征）

（1）对该培养基进行高压蒸汽灭菌，一般建议采用的温度和压力分别是________，除温度和压力之外，影响高压蒸汽灭菌效果的因素还有灭菌对象含菌量、灭菌对象PH、加热与散热速度以及________________等（答出2点即可）。

（2）为了观察菌落，还需加入到培养基中的成分是________，培养基转移到三角瓶或试管时必须用________。

（3）从染病枝条溃疡处剪取患病组织，________后置于培养基中培养，待菌落形态特征稳定后，用________法将该菌转移至三个分别含有等量0．5%水碱剂、40%福美砷、清水的PDA培养基中进行抗药性实验，每隔24h记录一次最后划线区域的菌落数目。

①选取菌落数目稳定的培养皿记录作为结果，这样可以防止________________。

②记录结果如下：

小组	0．5%水碱剂	40%美福砷	清水
菌落数目	2	8	17

分析得出结论：________________________________________________________________。

（二）回答与棉花培育及应用有关的问题：

（1）用________代替热碱来处理棉织物，可在比较温和的PH及温度条件下使处理后的织物手感柔软且强度增大。若用某些微生物来处理棉织物，发现产品质量明显变差，很可能是织物中的部分________被降解。

（2）为了培育岀“兔毛棉花”’，科研人员将兔角蛋白基因转入棉花受伤部位的细胞________中，再将这些细胞进行植物组织培养，为鉴定最终是否成功培育出“兔毛棉花”，在分子水平上可采用的检测方法是________________。

（3）棉酚是有毒性的化学物质，主要存在于棉花的根、叶和棉籽等器官中。棉籽含有高质量的蛋白质，科硏人员希望棉籽能成为人类的食物来源，除了对棉籽作脱酚处理之外，也可采用________技术对细胞中的特定基因进行定点改造，此项操作________（“改变”或“不改变”）特定基因的核苷酸序列。考虑到改造后的棉花要在自然环境中广泛种植，棉花叶中应________（“含有”或“不含有”）棉酚，理由是________________________。

Answer

90℃和500g/cm2 灭菌时间、灭菌对象的体积、灭菌锅内空气排除程度等 琼脂（或凝固剂） 三角漏斗 消毒 划线 因培养时间不足而导致遗漏菌落数；计数误差较大 0．5%水碱剂对该菌抑制效果最强，适合防治胴腐病（或0．5%水碱剂和40%美福砷都能抑制该菌生长，0．5%苦水碱剂抑制效果更强，最适合防治胴腐病） 果胶酶 纤维素 基因组（染色体DNA） 抗原-抗体杂交 基因敲除 改变 含有 让棉花具有抗虫能力

【解析】

除了实验用具必须无菌外，各种培养基也必须是无菌的。培养基是微生物生存的环境和营养物质。“细菌喜荤， 霉菌喜素”，通常细菌培养基要用蛋白胨和酵母提取物来配制，还要加入一定量的氯化钠，以维持一定的渗透压；霉菌培养基一般用无机物配制或添加蔗糖的豆芽汁即可。此外，细菌通常要求在中性偏碱的环境中生长，霉菌要求在中性偏酸的环境中生长，因此，在制备培养基时需调节培养基的酸碱度。加入培养基的三角瓶、试管也要在121C下灭茵15min，如果培养基中有葡萄糖，为防止葡萄糖分解碳化，要用90℃和500g/cm2灭菌30min。

果胶是植物细胞壁的主要成分，由半乳糖醛酸和半乳糖醛酸甲酯组成。山楂(山里红)的果实中果胶含量最多，煮沸的山楂泥可制成山楂糕，就是由于果胶的作用。果胶起着将植物细胞粘合在一起的作用，去掉果胶，就会使植物组织变得松散。果胶不溶于乙醇，这是鉴别果胶的一种简易方法。植物的细胞壁主要由纤维素、木质素(lignin)和半纤维素组成。因此，在枯树或草炭土中有许多能利用和分解这些物质来作为能源的微生物。已经发现并用于生产纤维素酶的菌种有绿色木霉。

（一）

（1）由于对该培养基中有葡萄糖成分，为了防止葡萄糖碳化，故在进行高压蒸汽灭菌，一般建议采用的温度和压力分别是90℃和500g/cm2，除温度和压力之外，影响高压蒸汽灭菌效果的因素还有灭菌对象含菌量、灭菌对象PH、加热与散热速度以及灭菌时间、灭菌对象的体积、灭菌锅内空气排除程度等
。

（2）菌落在固体培养基上才能形成，故为了观察菌落，还需在该培养基中加入琼脂（或凝固剂）已获得固体培养基，通常用三角漏斗将培养基转移到三角瓶或试管中

（3）从染病枝条溃疡处剪取患病组织经过消毒后置于培养基中培养，待菌落形态特征稳定后，用划线法将该菌转移至三个分别含有等量0．5%水碱剂、40%福美砷、清水的PDA培养基中进行抗药性实验。

①为了防止因培养时间不足而导致遗漏菌落数，通常选取菌落数目稳定的培养皿进行统计并记录作为实验结果，这样可以避免出现较大的计数误差。

②记录的实验结果显示，在加入0．5%水碱剂的培养皿中菌落数最少，40%美福砷次之，故此可得出如下结论：0．5%水碱剂对该菌抑制效果最强，适合防治胴腐病（或0．5%水碱剂和40%美福砷都能抑制该菌生长，0.5%水碱剂抑制效果更强，最适合防治胴腐病）。

（二）（1）由分析可知，用果胶酶在比较温和的PH及温度条件下可使处理后的织物手感柔软且强度增大。若用某些微生物来处理棉织物，由于某些微生物能产生纤维素酶，导致织物中的纤维素被分解，故织物质量明显变差。

（2）为了培育岀“兔毛棉花”，科研人员将兔角蛋白基因转入棉花愈伤组织细胞的基因组（染色体DNA）中，然后利用这些细胞进行植物组织培养，获得转基因植株，为鉴定最终是否成功培育出“兔毛棉花”，在分子水平上可采用抗原-抗体杂交的方法来检测目的基因是否成功表达。

（3）棉酚是有毒性的化学物质，科硏人员希望棉籽能成为人类的食物来源，除了对棉籽作脱酚处理之外，也可采用基因敲除技术对细胞中的特定基因进行定点改造，通过基因敲除技术改变了特定基因的核苷酸序列。考虑到改造后的棉花要在自然环境中广泛种植，为了使改造后的棉花能很好的适应环境，棉花叶中应含有棉酚，因为棉酚是有毒的化学物质，该物质的存在能让棉花具有抗虫能力。