Question

人类利用传统发酵技术使各种微生物经过发酵作用制作各种食品，在这些操作过程中请 你通过相关微生物的形态、结构以及生长繁殖的环境条件等特点回答以下问题：

（1）果酒的制作是利用酵母菌在______________的温度条件且______________条件下产生酒精；利用醋酸菌制作果醋的过程中则有两条途径得以实现：一个是____________________________，另一个是____________________________。

（2）为了更好地研究这些微生物的生命特征，研究人员往往要先配制适宜的培养基，通常用______________对菌种进行扩繁，用______________来观察菌落特征以辨别菌种。

（3）将分别盛有9毫升水的6支试管灭菌，并按10¹-10⁵编号，按下图中操作对乳酸菌进 行系列稀释，则6号试管中菌液浓度为4号的______________，若在5号试管中取样，在平板中涂布 出的菌落平均数为218，则原液中菌落浓度为______________个/毫升。

（4）在统计菌落数目的过程中甲乙两组同学分别用______________测定同一样品中的菌落数，在对应稀释倍数为10⁶的培养基中得到了不同的结果，甲组同学在第一个48小时内涂了一个平板，统计菌落数为215，为了增强可信度该同学又在第二个48小时内的了第二个平板， 统计菌落数为232，在第三个48小时内涂了第三个平板，统计菌落数为288；乙组同学则只用了一个48小时，同时涂了3个平板，统计面落数分别为21、212和256，两组同学都以这三个统计结果的平均数作为实验最终数据：甲组为247，乙组为163。你认为_____的结果更接近真实值，你认为这两组的实验需要改进吗?_____；改进方法是_______________________。

Answer

18-25℃ 缺氧和酸性 在氧气和糖源都充足时葡萄汁中的糖分解为醋酸 当缺少糖源时将乙醇变为乙醛，进而形成醋酸 液体培养基 固体培养基 1% 218╳105 稀释涂布平板法 甲组 需要 甲组应该同时涂三个平板，乙组应该舍掉21那一组，重新取样再做一组

【解析】

1、在利用酵母菌发酵时最好是先通入足够的无菌空气在有氧环境下一段时间使其繁殖，再隔绝氧气进行发酵；酒精发酵的最佳温度是在18℃～25℃，pH最好是弱酸性。

2、醋酸菌好氧性细菌，当缺少糖源时和有氧条件下，可将乙醇（酒精）氧化成醋酸；当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；醋酸菌生长的最佳温度是在30℃～35℃。

3、稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

（1）酵母菌产酒的最适温度为18-25℃, 且缺氧呈酸性的条件下产生酒精；而醋酸杆菌产生果醋时在有糖和无糖的时候都可以完成，所以有两条途径，一个为在氧气和糖源都充足时葡萄汁中的糖分解为醋酸，另一个为当缺少糖源时将乙醇变为乙醛，进而形成醋酸。

（2）液体培养基可以使微生物和菌液充分接触，提高微生物的生长速率，所以可以用液体培养基对菌种扩繁；而菌落的形成是在固体培养基上，所以用固体培养基观察菌落特征。

（3）系列稀释的操作是涂布计数之前的重要步骤，同时也涉及这之后对菌液浓度的估算，如本题图所示，菌液每稀释一次，浓度就减少到原来的1/10，所以6号是4号浓度的1/100，5号则是原液稀释5次之后的浓度，所以原液浓度应为218╳105个/mL

（4）测定活菌的数目通常使用稀释涂布平板法；微生物计数时应该选取30-300菌落数的平板，甲组统计了3次并求平均值，更接近真实值；微生物菌种是活菌，随着时间变化细菌浓度会改变，所以操作不应该分时间前后，因此甲组也不合理，应该同时涂三个平板，而乙组计数时有21菌落数出现，应该舍掉21那一组，为了增加信度应重新取样再做一组。