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为了提高马铃薯对真菌病害的抗性,某科研小组进行了马铃薯转基因抗病育种的初步研究,...

为了提高马铃薯对真菌病害的抗性,某科研小组进行了马铃薯转基因抗病育种的初步研究,其过程如下所示,请将其完善:

1)从生防木霉菌株中提取总RNA以及通过____________过程合成cDNA

2)利用PCR技术对目的基因Chi(抗菌基因)进行扩增:PCR产物与PMDTM18-T载体连接,转化到大肠杆菌,获得重组质粒PMDTM18-T-Chi

3)植物表达载体的构建(如图所示):将重组质粒PMDTM18-T-Chip33ECR质粒用____________(填具体酶)进行酶切,再用T4 DNA连接酶连接,得到p33ECR-Chi。此过程中一般会使用高浓度的TDNA连接酶,T4 DNA连接酶的作用是______________________。表达载体中p35S___________(填序号)识别和结合的部位。

DNA聚合酶          DNA连接酶

③限制酶            RNA聚合酶

4p33ECR-Chi工程菌的获得:将p33ECR-Chi质粒转化至农杆菌菌株中,在含_____________的培养基上获得白色菌斑,挑菌落,获得工程菌。

5)转基因植株的获得:通过农杆菌转化法将Chi基因转化到马铃薯栽培品种试管马铃薯的块茎中。试管马铃薯的块茎是马铃薯遗传转化的理想外植体,分析其具有的优点是_________________(填序号)

①周期长         ②取材方便          ③无需灭菌      ④转化效率高

6)对马铃薯进行抗菌检测:从分子水平上可采用_____________法检测目的基因表达的产物;从个体水平上进行检测的操作是_______________________

 

逆转录 BamHI和SacI 既可以“缝合”双链DNA片段互补的黏性末端,又可以“缝合”双链DNA片段的平末端 ④ 氨苄青霉素 ②③④ 抗原一抗体杂交 霉菌接种实验 【解析】 基因工程的基本操作步骤主要包括四步:①目的基因的获取;②基因表达载体的构建;③将目的基因导入受体细胞;④目的基因的检测与鉴定。 (1)cDNA是以mRNA为模板,通过反(逆)转录过程合成的。 (3)构建基因表达载体时,一般用限制酶对目的基因和载体进行切割,目的基因应插入启动子之后,由图中所示的表达载体组成可以看出,该表达载体构建时所用的限制酶为BamHI和SacI;T4 DNA连接酶的作用是:既可以“缝合”双链DNA片段互补的黏性末端,又可以“缝合”双链DNA片段的平末端;p35S是启动子,是RNA聚合酶识别和结合的部位。 (4)由图示基因表达载体可以看出,p33ECR-Chi的标记基因为氨苄青霉素抗性基因,因此在筛选该转化菌株时,应将p33ECR-Chi质粒转化至农杆菌的菌株,培养在含氨苄青霉素的培养基上进行筛选。 (5)试管马铃薯的块茎因其取材方便、无需灭菌、转化效率高等优点,是马铃薯遗传转化的理想外植体。 (6)对马铃薯进行抗菌检测:从分子水平上可采用抗原——抗体杂交法检测目的基因表达的产物;从个体水平上可采用霉菌接种实验进行检测。
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考点分析:
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据报道Scripps研究所的科学家开发了一种特殊的分子开关可逆的RNA开关,该开关可以嵌入基因疗法中控制基因表达。基因疗法通过将治疗性基因的拷贝插入患者的细胞来发挥作用,但是一旦将基因拷贝传递到患者的细胞中,就无法将其关闭或调节,因此迄今为止只有少数几种基因疗法被FDA批准。回答下列问题:

1)如图为真核细胞中基因表达过程的某一阶段,其中A_________________;图中消耗的有机物有_____________________B合成的方向是______________(填序号)。

①从左向右                 ②从右向左

2)真核细胞中核基因合成的B通过____________进入细胞质,与_____________结合进行蛋白质的合成。在此过程中,B上所蕴含的信息可通过tRNA准确表达的依据是tRNA上的一端携带特定的__________________,另一端的_____________mRNA上的密码子互补配对。

3)在正常人体中,B2100个碱基组成。通过基因疗法将治疗性基因的拷贝插入患者的细胞中,导致所形成的B只有1800个碱基(记作B’)。已知氨基酸的平均相对分子质量为120,通过基因疗法形成B所指导合成的一条多肽的相对分子质量最大为_________________(不考虑终止密码子)。

 

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2019112日,北京市确诊两例由内蒙古输入型的鼠疫患者后,这种传说中的黑死病再次进入人们的视线。回答下列问题:

1)鼠疫杆菌具有荚膜,其荚膜上存在两种抗原成分(F1V),人体中能处理并暴露内环境中这些抗原的细胞是_________________

2)鼠疫杆菌会在宿主体内产生外毒素和内毒素。在免疫学上,外毒素和内毒素都属于_______________________。由此推测,鼠疫杆菌感染者体内浆细胞产生针对鼠疫杆菌的抗体可能不止一种,原因是________________________

3)研究表明,将用鼠疫杆菌活化的T细胞输入小鼠之后,可以有效保护部分小鼠不被鼠疫杆菌感染,可能的原因是活化的T细胞分泌________________,促进B细胞增殖和分化为_____________________________________分泌相应的抗体。

4)鼠疫患者病愈后,一般可获得持久性免疫力,这主要是_________________(填序号)的作用。

①吞噬细胞         ②抗原        ③记忆细胞           ④淋巴因子

5)在研制鼠疫疫苗的过程中,中国西北农林科技大学的研究人员获得了以下4种相关的免疫组:融合蛋白免疫组(rF1-V),联合抗原免疫组(rF1+rV),单一抗原免疫组(rF1rV)。为探究各免疫组对鼠疫的免疫效果,可以进行的实验思路是将小鼠分成等量的4组,分别注射不同的免疫组,定期分别测定___________________________________________

 

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果蝇的正常眼和棒眼、黑背和彩背为两对相对性状,分别由等位基因A/aB/b控制。现有4种纯合品系果蝇:正常眼黑背、正常眼彩背、棒眼黑背、棒眼彩背,某小组对果蝇两对性状进行研究,用正常眼黑背雌果蝇和棒眼彩背雄果蝇杂交,得到F1都是正常眼黑背果蝇,让F1相互交配,F2结果如下表所示。该小组同学在统计结果时,由于疏忽只统计了个体的性状数量,未统计F1F2果蝇中雌雄的性别数量。回答下列问题:

F2表现型

正常眼黑背

正常眼彩背

棒眼黑背

棒眼彩背

数量

272

90

89

31

 

1)果蝇的黑背和彩背性状中,______________是显性性状。

2)能否确定等位基因A/aB/b独立遗传?______________,其原因是F2出现_____________的性状分离比,符合基因的_____________________

3)根据题意,等位基因A/aB/b在染色体上的位置关系有_________________(填序号)种可能(不具体区分在几号染色体上,不考虑XY染色体的同源区)。

1      2        3      4

4)请设计一次杂交实验,确定等位基因A/aB/b在染色体上的位置关系。

实验思路:选择纯合正常眼黑背个体作父本,纯合______________个体作母本,相互交配,统计子代雄果蝇的表现型。

实验结果:若子代雄果蝇全为_______________,则A/aB/b都位于常染色体上,且为非同源染色体;若子代雄果蝇全为__________________,则A/a位于常染色体上,B/b位于X染色体上;若子代雄果蝇全为___________________,则A/a位于X染色体上,B/b位于常染色体上。

 

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水产或家畜养殖污水中含有大量的类固醇,而这类化合物会对人体造成危害,且不易被降解,而丛毛单胞菌是日前用于降解这类有机污染物常用的需氧型菌种。由于抗生素的滥用,污水中含有大量的抗生素残余,这些抗生素会强烈地抑制丛毛单胞菌的作用,从而降低污水处理的效果。结合所学知识,回答下列问题:

1)从自然界中分离出能够降解类固醇化合物的丛毛单胞菌时,一般会从鱼塘废水或附近土壤进行取样,其原因是___________________________________________________________

2)筛选丛毛单胞菌时,通常以________________为唯一碳源的选择培养基进行筛选。制备这一培养基的一般步骤包括计算、称量,溶化、______________、倒平板。

3)研究人员从含抗生素的污水中分离出了3个抗生素耐药型丛毛单胞菌菌株(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)为了测试其在高浓度抗生素条件下的增殖能力,他们进行了如下实验:

①将等量的三种菌株,分别接种到添加了高浓度抗生素和一定量类固醇物质的细菌液体培养基中,测量计算初始培养液中种群密度的相对值,之后不断通入无菌空气,在适宜的条件下进行培养;

②接种培养开始后100小时内,每20小时取样一次,每次每种菌株重复3次计数,常利用_______________法接种进行活菌数的测定,从初始到实验结束,实验过程中需测定计数的样品次数为____________。在测定菌群密度相对值的同时,每次取样还要测定菌液中固醇类物质的浓度。

③下面的曲线图是根据实验过程中所获得的数据绘制而成。

a.与菌株Ⅱ、Ⅲ相比,实验进行到60小时左右时,造成菌株I种群密度下降的原因有______________(填序号)。

①种内斗争加剧           ②营养物质积累

③营养物质消耗           ④代谢废物消耗

b.从污水处理的角度分析及研究数据来看,菌株____________更适合作为污水中类固醇污染物的处理,理由是___________________________________________________________________________

 

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历史上的塞罕坝水草丰茂、森林茂密、禽兽繁集。从1863年开围放垦至解放初期,呈现“飞鸟无栖树,黄沙遮天日”的荒凉景象。1962年之后,两代知青用四十年青春和汗水,营造起万顷林海,成为河的源头、云的故乡、花的世界、林的海洋、珍禽异兽的天堂,这是人类改造自然的伟大创举。回答下列问题:

11863~1962年间,塞罕坝的森林群落被破坏,表明生态系统的_________________具有一定限度。1962年之后,塞罕坝沙漠生物群落发生了_________________演替,以上可说明人类活动可改变群落演替的_________________

2)在塞罕坝的自由放牧区,兔子、牛、羊和平共处,狼与狐正常出没。如图为能量流经兔子这一营养级的示意图,其中G表示流入狐所在营养级的能量,A表示兔摄入的能量,则兔用于自身生长、发育和繁殖的能量由图中__________表示。伴随D出现的碳元素存在形式变化是_______________。若一段时间内,兔子数量增长,则满足的关系是_____________(填序号)。

E>G+F           C-D>G+F      C≥D+G+F          A-B>D+G+F

3)如今的塞罕坝具有丰富的动植物资源、优美的自然风光和优越的气候条件,成为大量游客休闲观光的打卡之地,这主要体现了生物多样性的_____________价值和_________________价值。

 

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