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PCR扩增过程示意图如下,核心要素包括引物设计、温度控制和模板DNA的获得。请回答下列问题:

1)欲构建抗利尿激素的cDNA文库,应从________(组织)中提取________,通过________获得cDNA用于PCR扩增。

2)设计一对与抗利尿激素基因两端序列互补配对的引物时(引物1和引物2),一般在引物的________端需要增加适当的限制酶切割位点,其目的是____________________________

3PCR设计的引物序列一般介于2030 bp,若引物序列太长带来的影响主要是______________________________________

4PCR扩增时,退火温度的设定是成败的关键。退火温度的设定主要与________________有关。

5)如果模板DNA完全正常,但PCR反应得不到任何扩增产物,其原因可能为________________________

 

下丘脑 总mRNA 逆转录 5′ 便于酶切后构建基因表达载体(重组质粒) PCR特异性提高,但是引物与模板链的结合效率降低 引物长度、碱基组成 退火温度太高 引物设计错误 【解析】 利用PCR技术扩增目的基因:PCR是多聚酶链式反应的缩写,原理:DNA双链复制;过程:第一步:加热至90~95℃DNA解链(变性);第二步:冷却到55~60℃,引物结合到互补DNA链(退火);第三步:加热至70~75℃,热稳定DNA聚合酶从引物起始进行互补链的合成(延伸);扩增目的基因的前提:要有一段已知目的基因的核苷酸序列,以便根据这一序列合成引物。 (1)下丘脑分泌抗利尿激素,所以欲构建抗利尿激素的cDNA文库,应从下丘脑中提取总mRNA,通过逆转录等过程获得cDNA用于PCR扩增。这里提取mRNA是无法选择的,只能将所有mRNA均提取出来,在PCR时可以通过设计特异性的引物来达到PCR扩增某基因的目的。 (2)PCR是基因工程的第一步,为了后续构建基因表达载体,在设计一对与抗利尿激素基因两端序列互补配对的引物时(引物1和引物2),一般在引物的5′端需要增加适当的限制酶切割位点。 (3)PCR设计的引物序列一般介于20~30bp,若引物序列太长带来的影响主要是扩增效率降低,而引物太短又容易导致异常DNA的产生。 (4)PCR扩增时,退火温度的设定是成败的关键。退火温度的设定主要与引物长度和碱基组成中G-C比例呈正相关。 (5)如果退火温度太高,引物无法与模版链结合,所以如果模板DNA完全正常,但PCR反应得不到任何扩增产物,其原因可能为退火温度太高或引物设计错误(无法与任何模板链结合,无法进行DNA复制)
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考点分析:
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当股直肌受到牵拉时,能够反射性地引起股直肌的收缩反应,这种反射活动称为牵张反射。在牵张反射发生的同时,颉颃肌是保持舒张的。高尔基腱器官是一种可感受肌肉张力变化的感受器,其作用与牵张反射引起的作用相反,因此将高尔基腱器官引起的反射称为反牵张反射。反牵张反射为牵张反射提供了一种辅助功能,下图解释了这一工作原理。请回答下列问题:

1)反牵张反射的反射弧的神经中枢位于________,抑制性神经元和α运动神经元之间的内环境是________

2)高尔基腱受刺激后,兴奋以________形式沿Ib纤维传到神经中枢。α运动神经元末梢与肌肉细胞的接头部位类似于突触,兴奋在此部位只能单向传递的原因是_____________________

3)当抑制性中间神经元被激活后,与其形成突触联系的α运动神经元的神经纤维的膜内电位为________

4)在牵张反射的基础上,如牵拉力量进一步加大,则高尔基腱器官产生的兴奋使抑制性中间神经元被激活,进而通过与其形成突触联系的α运动神经元,引起股直肌的________,同时通过兴奋性中间神经元引起颉颃肌的收缩,这种调节的意义是______________________________________

5 当长时间站立时,股直肌会逐渐疲劳,因而________(选填降低或增强)了高尔基腱器官的兴奋性冲动发放,提高了α运动神经元的兴奋性,最终引起股直肌产生一个较大的收缩并使姿势维持在合适的状态。

 

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1981年经Anderson等人测定,全长为16569bp的人类线粒体基因组为裸露双链环状DNA,且可以是多拷贝的。下图为人类线粒体DNA和核DNA的协同作用示意图。请据图回答下列问题:

1 过程③需要的酶是____________,与④过程相比,过程③特有的碱基配对方式是________

2)线粒体DNA编码线粒体中少部分蛋白质和全部的tRNArRNA,其中所需的酶均由核DNA编码并以前体蛋白的形式转入线粒体,则RNA聚合酶发挥作用的场所有______________________

3α鹅膏蕈碱能特异性的抑制①过程,则图中受影响的过程有________(填序号),最终细胞会因________供应不足而坏死。

4)由于DNA聚合酶催化的子链延伸方向是________(选填“5′→3′”“3′ →5′” ) ,故过程④线粒体中DNA的复制属于________

A.单起点连续复制    B.单起点半不连续复制     C.多起点连续复制    D.多起点半不连续复制

5)线粒体中tRNA上的反密码子严格识别密码子的前两位碱基,而第三位碱基可以是随机的,结合所学的知识简述该机制的生物学意义:____________________________

 

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神经性耳聋、腓骨肌萎缩症是两种单基因遗传病,分别由BbDd基因控制。下图为某家族相关的遗传系谱图,其中已死亡个体无法知道其性状,经检测Ⅳ21不携带致病基因。据图分析回答:

1)神经性耳聋的遗传方式为________________,第Ⅳ代出现多个神经性耳聋患者的主要原因是______________________________________

2)Ⅴ23带有神经性耳聋基因的概率是________

3)腓骨肌萎缩症属于________性性状,为了确定腓骨肌萎缩症基因在染色体上的分布,科研人员对Ⅲ9~Ⅲ13个体含相关基因的DNA片段扩增后用某种限制酶处理,并进行电泳分析,得到如下结果:

根据电泳结果,你可以作出的判断是____________________________,判断依据是______________________________________

4 根据以上分析,Ⅲ9的基因型为________。若Ⅴ22与Ⅴ23婚配,他们后代中男孩不患病的概率是________

 

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科研人员在1000lx光强和25℃条件下,采用BG-11培养基研究不同曝气强度对小球藻生长过程的影响,曝气强度分别设置为02%10%20%30%50%70%,其中2%的曝气强度刚好保证小球藻不沉降至试管底,而曝入的空气量又可以忽略不计。实验测定波长680 nm的光吸收值(OD680)和叶绿素a的含量。请分析回答:

   

实验装置示意图  光密度(OD680)随实验时间的变化  叶绿素a浓度随实验时间的变化

1)由图1分析,该实验的光源应选择________(选填白炽灯或日光灯),目的是____________________________

2)光密度法是准确而快速的测出藻类生物量的有效办法,曝气强度为0的组别在取样前往往需要瞬时通入少量空气,其目的是____________________________

3)结合图2和图3分析,促进小球藻生长的最适曝气强度约为________。该实验中曝气的主要目的包括________________________________________________(至少写出2)

4)结合图2和图3分析,叶绿素a的含量变化能否反映小球藻繁殖情况?________。原因是____________________

5)有学者提出了“遮光曝气控藻法”的新思路,即在自来水取水口附近建成遮光曝气工程区,使水在该区域内停留一定时间以消除大部分藻类,试解释其中原理:_________________________

 

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某学校兴趣小组开展了探究不同浓度酒精对洋葱鳞片叶内表皮细胞毒害作用的课题研究。胭脂红是一种水溶性的食用色素,不能进入活细胞。经预实验确认006 g·mL1的胭脂红溶液是一种高渗溶液。

实验原理:①酒精积累对植物细胞有毒害作用;②________

材料用具:无水乙醇、蒸馏水、006 g·mL1的胭脂红溶液、洋葱鳞片叶内表皮、刀片、镊子、滴管、培养皿、烧杯、载玻片、盖玻片、显微镜等。

实验步骤:

步骤一:配制体积分数分别为05%10%15%20%25%30%的酒精溶液,分别量取10mL上述酒精溶液置于7个培养皿中。

步骤二:用镊子撕取洋葱鳞片叶内表皮分别置于7组酒精溶液中,浸泡处理30 min

步骤三:将经过不同浓度酒精处理的内表皮取出,分别置于等量的蒸馏水中漂洗10 min

步骤四:每组制作 3个临时装片,________

步骤五:在低倍镜下观察计数,每个装片计数2个不同视野中发生质壁分离的细胞数和细胞总数,计入相应表格。

请回答下列问题:

1)实验原理②是____________________________________

2)步骤四的剩余操作是________________________________________

3)从细胞大小和液泡变化的角度,描述活的洋葱鳞片叶内表皮细胞置于006 g·mL1的胭脂红溶液中,将出现的现象分别是________________________________________

4)步骤五在低倍镜下观察计数,有助于缩小实验误差,其原因是___________________

5)该研究小组的同学最后把表格中数据转变为右侧曲线图,根据曲线图,可以得出的结论是_____________________

6)为验证上述实验结论是否正确,该兴趣小组的同学还需进行的实验有①_______________,②____________________________,若实验结果与上述相同,则说明实验结论是正确的。

 

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