Question

回答下列（一）、（二）小题；

（一）回答与香蕉酒制作有关的问题；

（1）香蕉果肉含糖高，又有一定的酸度，适于作为果酒发酵的原料。但香蕉果浆的黏度大，需向香蕉果浆中添加果胶酶使果胶最终分解为__________________，使果浆中的固体与液体分离效果更好；然后进行沸水浴处理，原因是__________________，然后对产物进行__________________，可见果汁的出汁率与澄清度大大提高。

（2）将获得的果汁置于90℃环境中__________________处理15分钟，以减少其他杂菌干扰。取出果汁后冷却，再经过糖酸调配、硫处理后，最后向果汁中添加__________________进行果酒发酵。

（3）发酵后第15天，当发酵瓶中__________________，即表示发酵完毕，可取10mL香蕉酒离心获得__________________，利用__________________法测定香蕉酒的澄清度。

（二）回答与基因工程和单克隆抗体制备有关的问题：

（1）单克隆抗体在病毒的鉴定上具有重要的作用。首先将特定抗原物多次对小鼠进行腹腔注射，取小鼠的骨髓瘤细胞和脾细胞按一定比例混合，并加入一定量的PEG或__________________作介导进行融合。

（2）将融合好的细胞接种在__________________上，并置于CO₂培养箱内培养。经过一定时间后，将培养液中的杂交细胞通过__________________筛选出阳性杂交瘤细胞，为获得单一细胞群体和纯净均一的单克隆抗体，往往对阳性杂交瘤细胞进行__________________。

（3）单克隆抗体还可通过单个B细胞抗体技术获得。首先将分选到的单个B细胞进行裂解，获得特异性抗体的基因片段，利用__________________法对其进行扩增，随后构建重组质粒，并导入至细菌中大量复制，为了提高重组质粒导入细菌的效率，需要考虑__________________（至少答出两点）等因素。

（4）从细菌中提取扩增后的重组质粒，导入至小鼠成纤维细胞内表达抗体，37℃培养一段时间后，将培养液离心获取抗体，并进一步__________________、检测便可获得单克隆抗体。

Answer

半乳糖醛酸 沸水浴使纤维素等固形物凝聚 过滤 灭菌（杀菌） 酵母菌 停止出现气泡 上清液 比浊/光电比色/比色 仙台病毒 饲养层/滋养细胞 抗体检验 细胞克隆/克隆培养法 PCR 导入方法、筛选条件、防止污染、重组DNA的质量和浓度、试剂的质量（氯化钙的纯度）、受体细胞的生长状态和密度 纯化

【解析】

1、果胶酶不是特指一种酶，而是分解果胶的一类酶的总称，包括多聚半乳糖醛酸酶、果胶分解酶和果胶酯酶。

2、参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。果酒制作的原理：

（1）在有氧条件下，1分子C6H12O6和6分子H2O和6分子O2在酶的作用下生成6分子CO2和12分子H2O，并放出大量的能量；

（2）在无氧条件下，1分子C6H12O6在酶的作用下生成2分子CO2和2分子C2H5OH，并放出少量的能量。

3、基因工程的操作步骤为：

第一步：目的基因的获取：

（1）目的基因是指：编码蛋白质的结构基因；

（2）原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成，人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法；

（3）PCR技术扩增目的基因。

第二步：基因表达载体的构建：

（1）目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用；

（2）组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因。

第三步：将目的基因导入受体细胞：

（1）转化的概念：是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程；

（2）常用的转化方法：

①将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是农杆菌转化法，其次还有基因枪法和花粉管通道法等；

②将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是显微注射技术，此方法的受体细胞多是受精卵；

③将目的基因导入微生物细胞：Ca2+转化法。

（3）重组细胞导入受体细胞后，筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达。

第四步：目的基因的检测和表达：

（1）首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子杂交技术；

（2）其次还要检测目的基因是否转录出mRNA，方法是用标记的目的基因作探针与mRNA杂交；

（3）最后检测目的基因是否翻译成蛋白质，方法是从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原--抗体杂交；

（4）有时还需进行个体生物学水平的鉴定．如转基因抗虫植物是否出现抗虫性状。

4、单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。

（一）（1）香蕉果肉含糖高，又有一定的酸度，适于作为果酒发酵的原料。但香蕉果浆的黏度大，需向香蕉果浆中添加果胶酶使果胶最终分解为半乳糖醛酸，使果浆中的固体与液体分离效果更好；然后进行沸水浴处理，原因是沸水浴使纤维素等固形物凝聚，然后对产物进行过滤，可见果汁的出汁率与澄清度大大提高。

（2）将获得的果汁置于90℃环境中灭菌处理15分钟，以减少其他杂菌干扰。取出果汁后冷却，再经过糖酸调配、硫处理后，最后向果汁中添加酵母菌进行果酒发酵。

（3）发酵后第15天，当发酵瓶中停止出现气泡，即表示发酵完毕，可取10mL香蕉酒离心获得上清液，利用比浊（或光电比色或比色）法测定香蕉酒的澄清度。

（二）（1）单克隆抗体在病毒的鉴定上具有重要的作用。首先将特定抗原物多次对小鼠进行腹腔注射，取小鼠的骨髓瘤细胞和脾细胞按一定比例混合，并加入一定量的PEG或灭活病毒作介导进行融合。

（2）将融合好的细胞接种在饲养层或滋养细胞上，并置于CO2培养箱内培养。经过一定时间后，将培养液中的杂交细胞通过抗体检验筛选出阳性杂交瘤细胞，为获得单一细胞群体和纯净均一的单克隆抗体，往往对阳性杂交瘤细胞进行细胞克隆（或克隆培养法）。

（3）单克隆抗体还可通过单个B细胞抗体技术获得。首先将分选到的单个B细胞进行裂解，获得特异性抗体的基因片段，利用PCR法对其进行扩增，随后构建重组质粒，并导入至细菌中大量复制，为了提高重组质粒导入细菌的效率，需要考虑导入方法、筛选条件、防止污染、重组DNA的质量和浓度、试剂的质量（氯化钙的纯度）、受体细胞的生长状态和密度等因素。

（4）从细菌中提取扩增后的重组质粒，导入至小鼠成纤维细胞内表达抗体，37℃培养一段时间后，将培养液离心获取抗体，并进一步纯化、检测便可获得单克隆抗体。