Question

大肠杆菌是动物肠道中的正常寄居菌。少数种类的大肠杆菌在一定条件下会使人患病，如肠道出血性大肠杆菌可使人腹泻和便血，严重时危及生命。出血性大肠杆菌在添加血液的平板培养基上生长时，红细胞被细菌破坏而褪色，导致菌落周围形成透明圈。下图表示从污染的食物中分离和提纯该细菌的操作流程。请回答问题：

（1）细菌从肉汤培养基获得的营养成分有______________。

（2）据操作流程可知，将细菌接种在血平板上的方法是______________，接种完毕后要灼烧接种工具的目的是为了______________。

（3）研究细菌的致病性，先要获得纯度较高的细菌蛋白，凝胶色谱法是分离蛋白质的常用方法，在装填凝胶柱时不得有气泡产生，因为______________ ；若肠道出血性大肠杆菌的A蛋白质比B蛋白质后洗脱出来，则______________的相对分子质量较大。

（4）纯化后的细菌蛋白可以用_________测定分子量大小，在此过程中加入的SDS掩盖了不同蛋白质间的电荷差异，使得______________完全取决于分子的大小。

Answer

碳源、氮源、水、无机盐等 平板划线法 避免污染环境和感染操作者 气泡会扰乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果 B蛋白 电泳法 电泳迁移率

【解析】

1、培养微生物的各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、无机盐、碳源、氮源。
2、微生物培养时的接种方法最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法，接种的目的是使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，并在培养基表面形成单个细菌或真菌繁殖而成的子细胞群体——菌落。

3、凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分析蛋白质的有效方法，相对分子质量小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程长，移动的速度慢，相对分子质量大的蛋白质不容易进入凝胶内部的通道，路程短，移动的速度快，因此相对分子质量不同的蛋白质得以分离。

（1）肉汤培养基中含有水分、无机盐、蛋白质等物质，因此可为微生物提供的营养成分有：碳源、氮源、水和无机盐。

（2）据操作流程可知，图中的接种工具是接种环，故将细菌接种在血平板上的方法是平板划线法；接种完毕后要灼烧接种工具的目的是避免污染环境和感染操作者。

（3）研究细菌的致病性，先要获得纯度较高的细菌蛋白，凝胶色谱法是分离蛋白质的常用方法，由于气泡会扰乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果，故在装填凝胶柱时不得有气泡产生；凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质，相对分子质量小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程长，移动的速度慢，相对分子质量大的蛋白质不容易进入凝胶内部的通道，路程短，移动的速度快，因此若肠道出血性大肠杆菌的A蛋白质比B蛋白质后洗脱出来，则B蛋白的相对分子质量较大。

（4）纯化后的细菌蛋白可以用凝胶电泳法测定分子量大小；用凝胶电泳法测定蛋白质分子量时，需要在凝胶中加入SDS，目的是消除净电荷对迁移率的影响（或掩盖不同种蛋白间的电荷差别），使电泳迁移率完全取决于分子的大小。