Question

随着人们生活质量的提高，餐饮含油脂废水的排放量大量增加，合理处置油脂废水也成为新的课题。已知芽孢杆菌中有多种分解油脂产酸的菌种，科研人员欲采用下列流程筛选出能高效分解油脂的微生物。

菌种取样→分离培养→菌株的筛选→形态特征观察和生理生化反应鉴定回答下列问题：

（1）选取饭店附近排污渠的含油脂废水作为样本，采样约10g，立即装于试管内，此试管使用前需要经过________处理。

（2）样品分离培养前，一般需要将菌液进行________处理，然后吸取0．2ml菌液涂布到营养琼脂培养基平板上，置于37℃恒温培养箱内培养24h，记录菌落总数。将分离出的菌株按照菌落________等表观特征初步分类。

（3）上述步骤筛选出的菌株分别接种到含“花生油”的琼脂培养基平板上，37℃恒温培养箱中培养24h，筛选出油脂降解菌，培养基中“花生油”为菌种繁殖提供________。在该培养基还需要加入中性红染料（中性红为脂溶性染料，遇酸为红色，遇碱为黄色），挑选菌株要挑选显________降解圈的菌株，并且选颜色较________（填“深或浅”）的为宜。

（4）实际操作中，由于油脂易聚集成液滴，常在培养基中加入2-3滴乳化剂使油脂分散均匀，鉴定效果更好，试分析原因________________。

Answer

灭菌 稀释 形状、大小、隆起程度和颜色 碳源和能源 红色 深 油脂乳化后均匀分散在培养基表面，分解油脂的微生物产生的降解圈更为明显，便于快速分离和鉴定

【解析】

微生物的接种方法最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法，接种的目的是使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，并在培养基表面形成单个细菌繁殖而成的子细胞群体--菌落。

要筛选目的菌株需要根据微生物的生活习性选择合适的培养基。

（1）微生物实验需要无菌操作，所以试管使用前需要经过灭菌处理。

（2）菌液一般需要先经过稀释处理，再进行涂布。不同微生物菌落的形状、大小、隆起程度和颜色不同，所以可以根据菌落的特征初步分类。

（3）花生油的主要成分是脂肪，所以为菌种提供碳源和能源。脂肪可以被分解为甘油和脂肪酸，使培养基呈酸性，所以选择红色降解圈的菌株，并且颜色较深的脂肪酸含量越高，说明分解能力越强。

（4）油脂乳化后均匀分散在培养基表面，分解油脂的微生物产生的降解圈更为明显，便于快速分离和鉴定摸索与可以在培养基中加入2-3滴乳化剂。