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蛋白质的提取和分离在分子生物学研究中具有重要意义。回答下列与蛋白质的提取和分离相...

蛋白质的提取和分离在分子生物学研究中具有重要意义。回答下列与蛋白质的提取和分离相关的问题:

1)血红蛋白提取和分离一般分为四步,即样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。

①样品处理中红细胞的洗涤要用_________反复冲洗、离心,在洗涤红细胞时,离心速度过高和时间过长会使_________等一同沉淀,达不到分离的效果。洗涤干净的标志是_________

②在_________的作用下,洗涤好的红细胞破裂,释放出血红蛋白。

③粗分离过程中,透析的目的是_________

2)在洗脱过程中加入物质的量浓度为20mmol/L的磷酸缓冲液(pH70)的目的是_________

3)在装填色谱柱时不得有气泡存在,因为_________

 

生理盐水 白细胞 离心后上清液中不再呈现黄色 蒸馏水和甲苯 去除样品中分子量较小的杂质 准确模拟生物体内的生理环境,保持体外的pH和体内一致 气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序,降低分离效果 【解析】 蛋白质的提取和分离一般分为四步: (1)样品处理:包括洗涤红细胞;血红蛋白稀释;离心等操作收集到的血红蛋白溶液。 (2)粗分离:透析除去分子较小的杂质。 (3)纯化:通过凝胶色谱法将分子量较大的杂质蛋白质除去。 (4)纯度鉴定:通过聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定。 凝胶色谱法是根据分子量的大小分离蛋白质的方法之一。 (1)样品处理中红细胞的洗涤要用生理盐水反复冲洗、离心。洗涤红细胞的目的是去除杂质蛋白。达到该目的的关键是控制离心的速度和时间。白细胞和淋巴细胞中不含有血红蛋白,红细胞的洗涤过程中,离心速度过高和时间过长会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀,达不到分离的效果。洗涤干净的标志是离心后上清液中不再呈现黄色。洗涤好的红细胞在蒸馏水和甲苯的作用下破裂,释放出血红蛋白。透析的目的是去除样品中分子量较小的杂质。 (2)在洗脱过程中加入物质的量浓度为20mmol/L的磷酸缓冲液(pH为7.0)的目的是准确模拟生物体内的生理环境,保持体外的pH和体内一致。 (3)在装填色谱柱时不得有气泡存在,因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序,降低分离效果。
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考点分析:
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玉米是二倍体植物(2N20),同株异花,是遗传学上常用的实验材料。如图是植物的一些基因在染色体上的排列情况。该植物的株高受三对等位基因A-aD-dY-y控制,这三对基因的遗传效应相同,且具有累加效应(不考虑交叉互换和突变)。回答下列问题:

1)用图中亲本杂交获得F1F1随机交配获得F2F2的个体中株高与亲本不相同的个体占_________

2)玉米籽粒的甜与非甜是一对相对性状,分别由等位基因Bb控制,位于56号染色体上,用上述亲本杂交得到F1F1随机交配得到F2,经多次实验,若所得F2中籽粒非甜所占的比例总是3/5,则请推测其原因是_________

3)研究者将一个DNA片段导入到F1中甜玉米的体细胞中获得多株转基因玉米,导入的位置有四种,分别是:第1种在56号之外的其他染色体上;第2种在B基因所在的染色体上;第3种在b基因所在的染色体上,但不在b所在的位置;第4种在b基因的位置。为确定具体的插入位置,让转基因甜玉米随机交配统计子代的表现型及比例(说明:①插入的DNA片段本身不控制具体的性状;②玉米体内存在该DNA片段,B基因不表达,即该DNA片段和B基因同时存在时表现为非甜,b基因的表达不受该片段影响;③若玉米的受精卵无控制玉米籽粒甜度的基因(Bb),将导致胚胎致死;④结果只统计Bb控制的性状)

结果与结论:

①若子代_________,则该DNA片段的插入位置属于第1种可能性;

②若子代_________,则该DNA片段的插入位置属于第2种可能性;

③若子代_________,则该DNA片段的插入位置属于第3种可能性;

④若子代_________,则该DNA片段的插入位置属于第4种可能性。

 

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植物激素在植物生命活动中起着重要作用。回答下列问题:

1)植物激素是由植物体内产生,能从_________部位运送到_________部位,对植物的生长发育有显著影响的_________有机物。

2)黄瓜是二倍体植物(2N24),适宜浓度的生长素溶液处理未受粉的黄瓜雌蕊柱头,可以得到无子黄瓜,这种果实的细胞中染色体数目为_________条。无子黄瓜和三倍体无子西瓜分别属于__________________。(填“可遗传变异”或“不可遗传变异”)。

3GR24(独脚金内酯类似物)抑制侧枝的生长发育,研究者测定了豌豆的野生型和突变体(缺失独脚金内酯)植株中PIN蛋白(生长素输出载体)浓度,结果发现突变体中PIN蛋白的浓度高于野生型植株,由此推测GR24抑制侧枝发育的机理_________

 

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悬铃木具有较强的吸收有害气体、抵抗烟尘、隔离噪音的功能,适合做行道树。下图为悬铃木幼苗叶肉细胞中发生的生理过程,回答下列问题:

1)在上图中光合作用合成c以及呼吸作用生成b的具体场所分别是________________;在图中所示的情况下,该植株的干重_________(填“增加”“减少”或“无法确定”)。

2)该叶肉细胞胞间中的b至少需跨过_________层磷脂分子才能到达其被固定的场所;若在温度和光照都适宜的情况下,随着细胞间隙b浓度的增加,C5含量保持稳定,则此时叶肉细胞的光合速率____(填“大于”“小于”或“等于”)呼吸速率。

3)给悬铃木提供14CO2,根细胞在缺氧环境中可能会出现14C2H5OH14C转移的途径是_________

 

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动植物广泛存在的γ-氨基丁酸(GABA)具有抗惊厥、促进生长激素分泌、增强免疫力等生理作用。谷氨酸脱羧酶(GAD)能专一催化1 mol谷氨酸分解为1 molγ-氨基丁酸和1 mol CO2,回答下列相关问题:

1)为了探究GAD在最适温度、最适pH等条件下的活性,某研究小组利用起始浓度为10mmol·L-1的谷氨酸进行了实验,结果如图甲所示,图中的物质是___________;用一定时间内该物质的浓度变化衡量酶活性的原因是___________。 

2GAD的活性与温度的关系如图乙所示,研究者用GAD进行了以下实验:

步骤

组别

A1

A2

B1

B2

C1

C2

加入底物

 

2mL

 

2mL

 

2mL

加入酶

1mL

 

1mL

 

1mL

 

在相应温度下保温10min

t3

t3

e

d

t4温度下保温5min,再转移到t3温度下保温5min

f

酶和底物混合后继续在相应温度下保温

5min

5min

5min

检测比较各组产物量

CO2产生量

CO2产生量

CO2产生量

 

 

edf中对应的温度分别是___________________________

②本实验探究的问题是_________

③本实验的对照组是_________

 

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下图为动物细胞中蛋白质的生物合成示意图,下列有关叙述错误的是(   

A.该细胞中核糖体分布的场所有细胞质基质、线粒体等

B.完成①过程需要的酶有解旋酶和DNA聚合酶,这些酶进入细胞核需要穿过0层磷脂分子

C.图中所示生理过程的完成需要遵循碱基互补配对原则的有①②④⑥⑦⑧

D.该细胞中能够指导形成RNA的基因都能进行基因表达的全过程

 

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