Question

前不久，一种名为耳念珠菌的多重耐药真菌（超级真菌）在美国多地流行。请回答下列有关问题：

（1）实验室在培养皿中培养的超级真菌如图所示，其采用的培养方法最可能为____________________，要从超级真菌与其他细菌混杂的一个菌群中将超级真菌纯化，应当使用的培养基除碳源、氮源、水、无机盐、维生素以及必需的生长因子外，还需要添加__________制成选择培养基。

（2）超级真菌的基因（目的基因）在大肠杆菌细胞内表达时，表达出的蛋白质可能会被降解。为防止蛋白质被降解，在实验中应选用____________________的大肠杆菌作为受体细胞，在蛋白质纯化的过程中应添加__________的抑制剂。

（3）固定化技术包括包埋法、化学结合法和物理吸附法。假定经过基因工程处理后的超级真菌具有催化某种反应的生物活性，现欲长期使用并保存该超级真菌（突变体X），那么，宜使用的固定化技术是__________，不选用另外两种的理由是____________________。

（4）实验全部结束后需要对所有仪器以及废液进行后续处理。处理玻璃、金属仪器宜用干热灭菌法，此过程的温度为______；处理废液最适宜放置于高压蒸汽灭菌锅中，若未将锅内冷空气排尽，则会出现______________________________的后果。

Answer

平板划线法 抗生素 不含蛋白酶基因 蛋白酶 包埋法 包埋法适用于固定化细胞，化学结合法与物理吸附法更适合固定酶 160~170℃ 锅内温度达不到预设温度而影响灭菌

【解析】

1、微生物接种的方法中最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，前者是指通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种，逐步稀释分散到培养基的表面，后者是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。

2、灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外一切微生物的细胞、芽孢和孢子的过程，常用的方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌。

3、固定化酶、固定化细胞的比较：

固定化酶

固定化细胞

酶的种类

一种

一系列酶

制作方法

物理吸附法、化学结合法

包埋法

是否需要营养物质

否

是

缺点

不利于催化一系列的酶促反应

反应物不宜与酶接近，尤其是大分子物质，反应效率下降

优点

①既能与反应物接触，又能与产物分离②可以反复利用

成本低，操作容易

（1）培养方法包括平板划线法和稀释涂布平板法，稀释涂布平板法会使菌落在平板上均匀分布，平板划线法有多次划线，每次划线都来自于上一次划线的末端从而实现稀释，由图可知，超级真菌通过平板划线法接种在固定培养基上；超级真菌为多重耐药，故在纯化培养时，需添加抗生素，只有超级真菌能在添加了抗生素的选择培养基上生长。

（2）蛋白质会被蛋白酶降解，为防止蛋白质被降解，在实验中应选用不含蛋白酶基因的大肠杆菌作为受体细胞；在蛋白质纯化的过程中应添加蛋白酶的抑制剂来防止蛋白质的降解。

（3）固定化技术包括包埋法、化学结合法和物理吸附法，现欲长期使用并保存该超级真菌（突变体X），宜使用的固定化技术是包埋法，包埋法更适合固定细胞，而化学结合法与物理吸附法更适合固定酶，真菌属于细胞，故使用包埋法。

（4）处理玻璃、金属仪器宜用干热灭菌法，干热灭菌法常用的温度为160~170℃；处理废液最适宜放置于高压蒸汽灭菌锅中，若未将锅内冷空气排尽，则会出现锅内温度达不到预设温度而影响灭菌的后果。