Question

（一）回答与果酒及果醋制作有关的问题：

（1）将洗净的杏果放在多功能榨汁机中打碎，经_________即为杏果汁。榨汁时不需要对杏果进行严格的消毒处理，这是因为_________________。

（2）酿制杏果酒开始时一般要先通气，其目的是_________。若要进一步检测所得杏果酒中活体酵母菌的密度，可采用 ________法。但此种方法最终计算得出的菌体数往往比实际数目低。

（3）气温高的夏天制作成功的杏果酒若暴露在空气中酒味会逐渐消失而出现醋酸味，原因是_______。醋杆菌将乙醇变为醋酸的环境条件____________是糖源___________（填“充足”“少”）。

（4）杏果酒是目前天然可食植物制品中黄酮含量最高的饮品，具有抗衰老的作用。黄酮易溶于有机溶剂乙醇，常釆用萃取法提取果肉中的黄酮，振荡的作用是_______。对样品中的黄酮进行提取纯化后，用比色计于510nm波长处测定其________，与标准溶液比较，进行待测物中黄酮的定量测定。

（二）回答与基因工程和植物克隆有关的问题：

（1）用特定的限制性核酸内切酶切割含抗虫基因的DNA分子，把它重组到被限制性核酸内切酶切割出________的载体分子上，再把这个重组分子________到烟草细胞。

（2）用纤维素酶和果胶酶混合液总理烟草无菌苗的叶片获得原生质体时，要加入维持较高渗透压的甘露醇，理由是__________（写出2点）。

（3）将原生质体在 ________的甘露醇溶液中培养，才能重新长出细胞壁，形成胚性细胞。胚性细胞在__________培养条件下，经过培养基中成分的诱导，可通过________途径形成完整的烟草植株。

（4）要提高克隆的成功概率，要尽量选择细胞_________的基因型的烟草品种。

Answer

过滤 发酵液缺氧，酵母菌可以生长繁殖而绝大多数其他生物受抑制 让酵母菌在有氧条件下大量繁殖 涂布分离法 醋杆菌 醋杆菌是好氧细菌，夏季温度适合醋杆菌快速繁殖和发酵 缺少 使黄酮充分溶解在乙醇中 光密度值（OD值） 相同粘性末端（匹配末端） 转化（导入、转入、载入） 减少酶解时间，减少对细胞的损伤 等渗 液体 胚胎发生 全能性表达充分

【解析】

（一）1、参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。

2、参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。果醋制作的原理：
当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的果糖分解成醋酸。
当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。

（二）1、基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
2、植物组织培养经历的过程是脱分化形成愈伤组织，再分化形成幼根幼芽等，注意植物激素的浓度配比、无菌操作等。

（一）、（1）将洗净的杏果放在多功能榨汁机中打碎，经过滤后即为杏果汁。因为缺氧呈酸性的发酵液中，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物都因无法适应该环境而受抑制，榨汁时不需要对杏果进行严格的消毒处理。

（2）酵母菌在有氧条件下才能繁殖，酿酒先通气的目的是让酵母菌在有氧条件下大量繁殖，达到一定量开开始发酵。若要进一步检测所得杏果酒中活体酵母菌的密度，可采用涂布分离法，该方法检测活体酵母菌数时菌体数往往比实际数目低。

（3）气温高的夏天，制作成功的杏果酒若暴露在空气中酒味会逐渐消失而出现醋酸味，原因是空气中含有醋杆菌，醋杆菌是好氧细菌，最适生长温度为30～35℃，夏季温度适合醋杆菌快速繁殖和发酵；醋杆菌在缺少糖的有氧条件下才能将乙醇氧化为醋酸。

（4）黄酮易溶于有机溶剂乙醇，常采用萃取法提取果肉中的黄酮，振荡的作用是使黄酮充分溶解在乙醇中，黄酮和乙醇充分混匀以利于提取。利用分光光度法于510nm波长下测定其光密度值（OD值），与标准溶液比较，进行待测物中总黄酮的定量测定。

（二）（1）抗虫基因的DNA分子和的载体分子匹配末端（具有相同的粘性末端）；才能重组，重组DNA分子导入到受体细胞的过程称为转化。

（2）用纤维素酶和果胶酶混合液处理烟草无菌苗的叶片获得原生质体时，要加入维持较高渗透压的甘露醇，理由是减少酶解时间，减少对细胞的损伤。

（3）原生质体只有在等渗溶液中才能再生细胞壁，形成胚性细胞。胚性细胞在液体培养条件下，经过培养基中成分的诱导；可发生类似受精卵经过卵裂、分化、器官发生和形态建成而发育成胚的过程，是通过胚胎发生途径形成完整的植株。

（4）要提高克隆的成功概率，要尽量选择细胞全能性表达充分的基因型的烟草品种。