Question

某兴趣小组用从不同环境中采集的土壤等进行了“分解纤维素的微生物的分离”实验，实验过程为：土壤取样→选择培养→梯度稀释→将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上→挑选产生透明圈的菌落，实验结果见下表1：

表1　不同土壤微生物对纤维素的分解

组别	1	2	3
样品	松针腐叶花盆土	表层草地土	菌料
目的菌落类型	细菌、真菌	细菌	霉菌为主
透明圈直径	＋＋＋	＋＋	＋＋＋＋

（1）上述实验过程中“选择培养”的目的是________________。

（2）与30℃相比，37℃培养时霉菌类纤维素分解菌生长迅速，菌丝会________其他菌落，对后续菌种的分离造成困扰，因此采用30 ℃培养为佳。

（3）兴趣小组在鉴别菌种时尝试了两种方案：A． 先培养微生物，再加入刚果红染色；B． 直接在加入刚果红的鉴别培养基上培养微生物。结果发现：A方案在漂洗多余刚果红的过程中，易出现菌落浮起被带走的现象，从而造成________，故选方案B。由于刚果红在高温下容易被分解，应在培养基灭菌________（填“前”或“后”）加入。

（4）有小组成员根据表1结果中的________，认为菌料中的目的菌分解纤维素的能力最强，其他成员对此观点提出异议。兴趣小组继续对三组样品进行透明圈直径、菌落直径和酶活力的测定，实验结果如下表2：

表2　不同H/C值纤维素分解菌酶活性的比较

组别	H（透明圈直径）（单位：cm）	C（菌落直径）（单位：cm）	H/C值	酶活力（U/mL）
1	2．06	0．48	4．3	1．7
2	1．68	0．30	5．6	2．4
3	2．62	0．41	6．4	2．9

你认为将________作为判断纤维素分解菌分解能力大小的依据更合理，其大小与酶活力呈________相关。

（5）兴趣小组欲对培养液中的纤维素分解菌进行计数，具体做法是：先在培养基上加入若干质量较轻的小球，然后在平板上滴加一定体积的培养液，盖上培养皿盖后左右摇晃。试分析这样做的目的是________。

Answer

增加纤维素分解菌的浓度 覆盖 菌落的混杂 后 组别3中透明圈直径最大 透明圈与菌落直径之比（H/C值） 正 使菌液均匀分布

【解析】

分解纤维素的微生物的基本过程如下：土壤取样→选择培养→梯度稀释→将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上→挑选产生透明圈的菌落，其中选择培养的目的是增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需的微生物，选择培养所用的培养基中唯一的碳源是纤维素，在纤维素分解菌的培养基中需要加入的特殊物质是刚果红，刚果红与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，我们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。

（1）根据以上分析可知，选择培养的目的是增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需的微生物。

（2）根据题意，与30℃相比，37℃培养时霉菌类纤维素分解菌生长迅速，导致菌丝会覆盖其他菌落，对后续菌种的分离造成困扰，因此采用30 ℃培养为佳。

（3）根据题意可知，分析两种方案可知，A方案先培养微生物，再加入刚果红染色，A方案中在用氯化钠溶液漂洗多余刚果红的过程中，易出现菌落浮起被带走的现象，从而造成菌落的混杂的现象，故选B方案，即直接在加入刚果红的鉴别培养基上培养微生物。由于刚果红在高温下容易被分解，培养基一般采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌，因此应在培养基灭菌后添加刚果红。

（4）根据以上分析可知，在纤维素分解菌的培养基中加入刚果红，刚果红与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，我们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。分析表1结果可知，表1中的组别3中透明圈直径最大，小组成员认为菌料中的目的菌分解纤维素的能力最强，但是其他成员对此观点提出异议。兴趣小组继续对三组样品进行透明圈直径、菌落直径和酶活力的测定，分析表2中的数据可知，随着H/C值的增大，酶活力增强，因此将透明圈与菌落直径之比（H/C值）作为判断纤维素分解菌分解能力大小的依据更合理，其大小与酶活力呈正相关。

（5）根据题意可知，该题测定纤维素分解菌的方法类似血球计数板计数法，具体做法是：先在培养基上加入若干质量较轻的小球，然后在平板上滴加一定体积的培养液，盖上培养皿盖后左右摇晃，这样使得菌液分布均匀，计数较为准确。