Question

枯草芽孢杆菌产生的蛋白酶在医药和化工等领域具有重要的价值。为筛选蛋白酶产量高的枯草芽孢杆菌菌株，分别将浸过不同菌株的提取液（a~e）及无菌水（f）的无菌圆纸片置于平板培养基表面，在37 ℃恒温箱中放置2~3天，结果如图所示。请回答问题：

（1）在培养包括枯草芽孢杆菌在内的异养型微生物时，培养基营养成分应包括水和_______________，配制图1培养基的基本步骤是计算→称量→_____→灭菌→倒平板。

（2）a~e中蛋白酶产量最高的菌株是__（用字母回答），判断依据是________________。

（3）分离和纯化枯草芽孢杆菌可用稀释涂布平板法。在进行稀释涂布平板操作时，要将菌液进行一系列的_____________，涂布时，要将涂布器末端浸在盛有体积分数为______的烧杯中。

（4）工业上生产碱性蛋白酶成本高，目前可以采用___________技术多次重复使用以降低成本。

Answer

无机盐、碳源、氮源 溶化 a a周围的透明圈最大，说明其产生的蛋白酶数量多 梯度稀释 70%的酒精 固定化酶

【解析】

1、稀释涂布法：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，在适宜条件下培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。

2、微生物的营养成分主要有：碳源、氮源、水和无机盐等。大多数微生物是异养生物，在培养微生物时需要满足其生长的温度、pH和氧气等条件。

3、由于细胞相对于酶来说更大，难以被吸附或结合，因此多采用包埋法；由于酶小，容易从包埋的材料中漏出，采用物理吸附法和化学结合法。

（1）微生物的营养成分主要有：碳源、氮源、水和无机盐等，培养基的基本步骤是计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。

（2）图中a~e中，a周围的透明圈最大，说明其产生的蛋白酶数量多，故蛋白酶产量最高的菌株是a。

（3）在进行稀释涂布平板法操作时，首先要将菌液进行一系列的梯度稀释；进行涂布平板操作前，要对涂布器进行灭菌，一般做法是先将涂布器浸在盛有70%酒精的烧杯中，然后将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。

（4）生产碱性蛋白质酶成本高，目前可以采用固定化酶技术多次重复使用酶以降低成本，该技术常使用方法是化学结合法和物理吸附法。