Question

将鼠的精子在保存液内与含有A基因的重组质粒保温30 min，然后用于人工授精，共培育出127只小鼠。待小鼠生长至适宜大小时，对其中的36只进行PCR和DNA分子杂交检测。结果表明，有6只携有A基因的转基因鼠，且体型大约为普通鼠的2倍。请回答下列有关问题：

（1） A基因（目的基因）表达效果与________基因相同。

（2）利用PCR技术可以扩增目的基因，PCR 技术的原理是___，该反应体系的主要成分应该包含扩增缓冲液、____、___、Taq 酶、引物等；引物应选用下图中的_____（填图中标号）。

（3）检测A基因是否转录出mRNA时，需要用_________做探针，再与相应的物质杂交。

（4）在胚胎移植前对胚胎进行了检查和筛选，发现有些胚胎因为外源基因的插入而死亡，外源基因插入导致胚胎死亡的原因可能是_______________。

Answer

生长激素 DNA双链复制 模板DNA dNTP（四种脱氧核苷酸或脱氧核糖核苷三磷酸） A、D 放射性同位素标记的含目的基因的DNA片段 外源基因的插入导致胚胎正常发育所需的基因不能表达

【解析】

1、PCR技术反应的条件：①稳定的缓冲溶液环境；②DNA模板；③合成引物；④四种脱氧核苷酸；⑤耐热的DNA聚合酶；⑥温控设备。

2、基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成；

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等；

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法；

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）题干信息中“转入A基因的老鼠的体型大约为普通老鼠的2倍”，说明A基因（目的基因）表达效果与生长激素基因相同。

（2）PCR是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术，其原理是DNA双链复制。PCR反应体系包含缓冲液、Taq酶、原料（四种脱氧核苷酸或脱氧核糖核苷三磷酸）、引物以及模板（模板DNA）；引物应选用图中的A和D。

（3）检测目的基因是否转录出mRNA时，需要用标记的目的基因片段（放射性同位素标记）做探针，再与相应的物质杂交。

（4）胚胎移植前对胚胎进行了检查和筛选，发现有些胚胎因为外源基因的插入而死亡，可能原因是外源基因的插入导致胚胎发育所需的正常基因不能表达。