Question

现已知细菌的抑藻方式有直接抑藻（细菌与藻细胞直接接触）和间接抑藻（细菌分泌胞外抑藻物质）两种方式。研究人员从养殖场新鲜养殖废水中筛选出了一株对某有害水华藻具高效抑藻能力的菌株，大致过程如下：制备养殖废水稀释液→接种于固体培养基→细菌纯化培养→发酵液抑藻实验→筛选菌株。回答下列问题。

（1）培养基中能同时提供碳源、氮源的成分是_______（填“蛋白胨”“葡萄糖”或“NaC1”）。为避免由于微生物繁殖导致培养基_______而不适宜使用，配制好的培养基要立即进行_______灭菌。

（2）制备不同浓度的养殖废水稀释液时每次都要更换无菌移液管，原因是_______。

（3）为探究该菌株的抑藻方式，将适量去除菌体的发酵液（甲组）、含菌体的发酵液（乙组）和无菌培养基（丙组）分别加入到有害水华藻液中，适宜条件培养一段时间，统计有害水华藻的数量。若结果是_______，表明该菌株能进行间接抑藻。

（4）对该菌株的胞外物质进行透析，在截留分子量分别为1000 Da、500 Da和100 Da（Da表示单位）的透析袋（作用与半透膜相似）透析后，发现袋内物质抑藻能力分别是无、有和有。这表明提取出来的抑藻物质的分子量范围最可能是_______。

Answer

蛋白胨 污染 高压蒸汽 使用过的移液管中的残留液会影响实验结果 甲、乙两组水华藻细胞的数量均明显低于丙组 500 Da～1000 Da

【解析】

1、培养基的营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。

2、培养基灭菌常用的方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌，使用对象主要有接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等。

3、本实验属于典型的对照实验，其中自变量为细菌是否产生抑藻物质，因变量是水华藻的数量。对照组为空白对照，加入的是无菌培养基；实验组是用含有菌株的发酵液，其他影响实验的变量（如水华藻数量、生长条件等）为无关变量，在对照实验中，无关变量必须保持相同。

4、由半透膜制作的透析袋，具有选择透过性，允许水分子及其它一些溶剂分子和小分子通过，而一些大分子物质不能通过。

（1）在细菌培养时，培养基中能同时提供碳源、氮源的成分是蛋白胨。获得纯净的培养基是研究和应用微生物的前提，为避免由于微生物繁殖导致培养基污染，操作者需用酒精擦拭双手消毒，对金属用具、玻璃器血、培养基等要进行灭菌，其中，培养基只能用高压蒸汽灭菌。

（2）制备不同浓度的养殖废水稀释液时需要使用移液管。洗净后的移液管内壁应不挂水珠。移取溶液前，应先用滤纸将移液管末端内外的水吸干，每次使用时需更换无菌移液管，原因是使用过的移液管中的残留液会改变所移取溶液的浓度，影响实验结果。

（3）为探究该菌株的抑藻方式，自变量是抑藻物质，因变量是水华藻细胞数量。其中甲、乙两组加入的是含菌体的发酵液与水华藻细胞，为间接抑藻（细菌分泌胞外抑藻物质）；丙组加入的是无菌培养基与水华藻细胞，为空白对照。若该菌株能进行间接抑藻，则甲、乙两组水华藻细胞的数量均明显低于丙组。

（4）从题干信息可知，用截留分子量为1000 Da的透析袋对该菌株的胞外物质进行透析后，袋内物质无抑藻能力，说明菌株胞外物质可以透过截留分子量为1000 Da的透析袋；用500 Da和100 Da的透析袋对该菌株的胞外物质进行透析后，袋内物质有抑藻能力，说明菌株胞外物质不能透过截留分子量为500 Da和100 Da的透析袋。这表明提取出来的抑藻物质的分子量范围最可能在500 Da～1000 Da之间。