Question

不同品牌的酸奶具有不同的口味，某研究小组利用含碳酸钙的固体培养基探究甲、乙品牌酸奶中乳酸菌的类型是否相同（乳酸能够溶解碳酸钙，使培养基变得透明）。请回问题：

（1）将甲、乙两品牌酸奶中的乳酸菌纯化，分别接种在含碳酸钙的固体培养基中培养，相据菌落周围____________可确定酸奶中乳酸菌的类型，原理是____________。

（2）家庭制作酸奶时，在纯牛奶中加入少量酸奶相当于微生物培养技术中的____________操作，纯牛奶变成酸奶，改变了口味但含有的能量减少，原因是____________。

（3）为长期保存纯化的优质乳酸菌，可将菌液与____________充分混匀，置于-20℃的冷冻箱中保存。

（4）该研究小组用稀释涂布平板法进一步探究甲品牌酸奶中乳酸菌数量，在实验时需要做A、B、C三个平板，目的是____________，如果平板菌落数超过300，一般还需进一步____________。

Answer

透明圈的大小 在相同时间内不同类型的乳酸菌产生乳酸的量不同，不同量的乳酸能够溶解碳酸钙量不同，形成的透明圈大小不同 接种乳酸菌 在发酵时使牛奶中的营养成分发生改变，乳酸菌细胞呼吸消耗部分有机物，从而使能量减少 灭菌的甘油 设置重复组，取平均值，使实验结果更加准确可靠 稀释

【解析】

本实验的原理是：由于乳酸菌分泌的乳酸能够溶解碳酸钙，使培养基变得透明，所以不同类型的乳酸菌分泌乳酸的量不同，分泌量多的产生的透明圈较大，而分泌量少的产生的透明圈则较小。因此可以根据菌落周围透明圈的大小，来探究甲，乙两品牌酸奶中乳酸菌的类型。

（1）据上分析可知，在相同时间内不同类型的乳酸菌产生乳酸的量不同，不同量的乳酸能够溶解碳酸钙量不同，形成的透明圈大小不同，因此可以根据菌落周围透明圈的大小，确定酸奶中乳酸菌的类型。

（2）由于酸奶中含有乳酸菌，因此在纯牛奶中加入少量酸奶相当于微生物培养技术中的接种操作。纯牛奶变成酸奶是由于乳酸菌发酵的结果，乳酸菌在发酵过程中利用牛奶中的营养物质进行代谢，通过细胞呼吸消耗了牛奶中的部分有机物，因此酸奶比纯牛奶中的能量减少了，在乳酸菌代谢过程中又有新物质的生成，从而使牛奶中的口味发生了改变。

（3）微生物菌种的保藏有临时保藏和长期保藏之分，对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。即将菌液转移到甘油瓶中，与灭菌的甘油充分混匀后，放在-20℃的冷冻箱中保存。

（4）用稀释涂布平板法计数时，要至少涂布3个平板，目的是设置重复组，取平均值，使实验结果更加准确可靠。为了保证结果准确，一般选择菌落数中30~300的平板进行计数，如果平板菌落数超过300，说明稀释倍数不够，一般还需进一步稀释。